Bacteriofagos de enterococos: aislamiento, caracterización e implementación de un modelo de descolonización in vitro.

RAMÍREZ, B.; BOSCARO, G.; BYRNES, C.; VIEGAS CAETANO, J.; CENTRÓN, D.; PÉREZ, P. F. Y LOPARDO, H.

Córdoba

Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología; 2007

Los enterococos son reconocidos como patógenos nosocomiales capaces de colonizar a los pacientes hospitalizados durante meses. El uso de diversos antibióticos ha producido resultados desalentadores en el proceso de descolonización de enterococos resistentes a vancomicina. Los objetivos de este trabajo fueron aislar y caracterizar feno y genotípicamente a bacteriófagos líticos activos frente a enterococos para su uso en un modelo de descolonización con enterocitos humanos en cultivo. Se emplearon hisopados de materia fecal resuspendidos en 5 ml de solución fisiológica filtrados con filtros de 0,22 mm. Se determinó el espectro de infectividad de los bacteriófagos sobre diferentes cepas bacterianas. Se estudió su cinética de actividad lítica, su morfología por microscopía electrónica y parte de su genoma por secuenciación, previo clonado del material genético.  La capacidad de los enterococos de adherirse a células eucarióticas se determinó por microscopía utilizando células Vero.  En el modelo de descolonización se emplearon enterocitos humanos  en cultivo (Caco-2) y se determinaron los enterococos remanentes (recuentos en placa) luego de incubaciones con diferentes concentraciones de enterococos y bacteriófagos.    Se obtuvieron dos bacteriófagos activos contra al menos una de las cepas indicadoras de <i>Enterococcus</i> spp. El bacteriófago BE-1 presentó actividad sobre una sola de las cepas ensayadas mientras que BE-2 resultó activo contra casi todos los aislamientos de <i>Enterococcus</i>  spp e inactivo contra bacterias de otros géneros. Este último, por su cabeza icosaédrica y la simetría de su cola fue caracterizado como perteneciente a la familia Siphoviridae. Al menos en el 20% de su secuencia no se observaron genes de resistencia ni virulencia. En el estudio de adherencia 6 cepas adhirieron en mayor medida que las demás. En el modelo de descolonización, el título de enterococos disminuyó a medida que se aumentó la concentración del fago pero se vio que la eliminación no era total y a su vez que el grado de descolonización estaba en relación directa con la multiplicidad de infección.     Conclusiones: Se demostró la existencia de bacteriófagos capaces de lisar diferentes aislamientos clínicos de enterococos. Ensayos realizados en el modelo de descolonización con células Caco-2, demostraron  que la actividad de los bacteriófagos se mantenía aún cuando las bacterias estaban adheridas a las microvellosidades. Estos hallazgos evidencian la potencialidad de los bacteriófagos seleccionados en nuevas estrategias de descolonización y alientan la realización de experiencias <i>in vivo</i>