Efecto del kefiran en la interacción de Bacillus cereus con enterocitos humanos en cultivo

MEDRANO, M.; ABRAHAM, A. G. Y PÉREZ, P. F.

Buenos Aires

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología de Alimentos; 2006

Bacillus cereus es un microorganismo Gram (+), que frecuentemente contamina alimentos debido a su capacidad de formar endosporas. Puede producir exotoxinas que provocan en el hombre dos tipos de síndromes: emético y diarreico. Su capacidad de adherirse a células intestinales constituye un factor adicional de virulencia. El kefiran es un exopolisacárido producido por algunos microorganismos de los gránulos de kefir y es capaz de disminuir la citotoxicidad asociada a la producción de toxinas de B.cereus in vitro. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del kefiran en la respuesta de los enterocitos frente a la infección con B.cereus. Se utilizaron células de la línea Caco-2 en confluencia (14 días en cultivo) y  células vegetativas de B.cereus (cepa B10502), crecidas en BHI + glucosa durante  3 h. a 32°C en agitación. El kefiran se aisló de gránulos de kefir mediante disolución en agua caliente, precipitación con etanol, centrifugación y liofilización. Se comprobó la ausencia de proteínas y de lactosa mediante Bradford y TLC.  Las células se coincubaron  con suspensiones de bacilos sin kefiran o con 800 mg/L, durante diferentes tiempos. Todas las soluciones para los experimentos se realizaron en presencia de cloramfenicol 100 μg/ml para evitar el crecimiento de los bacilos.  Se evaluó el porcentaje de desprendimiento de las células Caco-2  mediante fijación y tinción de las células adheridas con cristal violeta. Se evaluó el grado de necrosis y el nivel de desorganización del citoesqueleto de los enterocitos. Luego del tratamiento, las células se incubaron con yoduro de propidio (colorante de ácidos nucleicos que sólo tiñe células que están en procesos de necrosis), y se observaron en microscopio de fluorescencia, cuantificando el número de células necróticas por campo. Para evaluar el estado del citoesqueleto, las células se trataron con FITC-faloidina. Se observó que la presencia de kefiran disminuyó el efecto necrótico causado por el bacilo, reduciendo el número de células necróticas por campo. Los bacilos provocaron desorganización del citoesqueleto y acortamiento de las microvellosidades en las células Caco-2. En presencia de kefiran  la distribución de los filamentos de actina no sufrió alteraciones importantes. Se observó una significativa disminución del desprendimiento causado por la infección. Mientras que el contacto de los enterocitos con los bacilos provocó un desprendimiento del 80% del total de las células, en presencia de kefiran  disminuyó a un 20-30%. La interacción entre B. cereus y enterocitos humanos da lugar a profundos efectos en la célula eucariota. El kefiran podría estar modificando la interfase bacteria-enterocito minimizando la interacción y/o adsorbiendo factores tóxicos del bacilo. Nuestros resultados demuestran un campo aún no explorado en la aplicación de los exopolisacáridos sintetizados por bacterias lácticas.