Antagonismo de cepas de lactobacilos frente al efecto biológico de E. coli enterohemorrágica (O157:H7) en cultivos celulares.

HUGO, A. A.; KAKISU, E. J.; DE ANTONI, G. L. Y PÉREZ, P. F.

Quilmes

Congreso; III Congreso Argentino de Microbiología General.; 2006

Escherichia. coli enterohemorrágica (EHEC) es un patógeno emergente asociadao a brotes de diarrea, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). Los factores de virulencia más importantes caracterizados son la toxina Shiga y la intimina, principal responsable de la lesión attaching/effacing (A/E), en células epiteliales. Algunas cepas de lactobacilos han demostrado su capacidad de actuar como probióticos antagonizando el daño provocado por los patógenos intestinales. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto protector de dos cepas de lactobacilos frente al daño provocado por E.coli (EHEC) en cultivos celulares de la línea Hep-2, modelo de la lesión  A/E intestinal. Se utilizó la cepa 69160 de Escherichia coli (O157:H7) aislada de un caso de SUH. Las bacterias lácticas empleadas fueron Lactobacillus delbrueckii subsp lactis (cepa CIDCA 133) y Lactobacillus plantarum  (cepa CIDCA 114). Los cultivos celulares de la línea Hep-2 se crecieron hasta confluencia en medio DMEM a 37ºC en atmósfera con 5% de CO2. Las monocapas fueron incubadas con el sobrenadante del cultivo de EHEC con o sin microorganismos, y en los ensayos de protección se preincubaron con lactobacilos. La asociación bacteriana se determinó por recuento de viables. El desprendimiento celular se evaluó mediante tinción con cristal violeta. El daño por adhesión bacteriana se registró mediante tinción del citoesqueleto con faloidina fluorescente y por microscopía electrónica de barrido. El desprendimiento de celular luego de la incubación de EHEC en su sobrenadante alcanzó un 50%, la preincubación con los lactobacilos elevó el porcentaje de células adheridas al 80 %. El daño provocado al citoesqueleto fue mayor cuando la cepa de EHEC se incubó junto con su sobrenadante y en ambos casos fue significativa la protección de las BAL. La microscopía de barrido confirmó los resultados obtenidos mediante la fluorescencia. La preincubación con lactobacilos sólo disminuyó significativamente la asociación de EHEC a bajas concentraciones de la misma, por lo tanto no sería el principal mecanismo que explique el efecto protector. Los resultados muestran la capacidad de lactobacilos de antagonizar eventos claves en la patogénesis de E.coli enterohemorrágica.