Influencia del estrés en la actividad inmunomoduladora a nivel intestinal de Kluyveromyces maraxianus.

PENDON M.D.; MADEIRA JR, J; GOMBERT A; RUMBO M; GARROTE G L

Buenos Aires

Congreso; XV Congreso Argentino de Microbiología (CAM); 2019

Asociación Argentina de Microbiología

Los procesos tecnológicos a los que son sometidos los microorganismos durante la producción de alimentos pueden causar alteraciones en su funcionalidad biológica. Se han descripto levaduras de Kluyveromyces marxianus con capacidad de resistir las condiciones del tracto gastrointestinal e inmunomodular, entre otras características que las hacen atractivas para su empleo como probióticos. El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto de la deshidratación de levaduras en su capacidad de modular in vitro la respuesta inflamatoria del epitelio intestinal.Para ello, se ensayaron levaduras Kluyveromyces marxianus Km4, Km9 (aisladas de gránulos de Kefir, colección del CIDCA), Km22 y Km27 (colección del LEMeB, UNICAMP). Las cepas fueron crecidas en permeado de suero de leche durante 24h a 30°C y luego sometidas a un proceso de deshidratación utilizando Spray-dryer BUCHI (Mini Spray Dryer B-290), con un flujo de alimentación de 8-11 mL/min y temperatura de entrada y salida de aire de 130°C y 58-62°C, respectivamente. Se prepararon suspensiones de cada levadura deshidratada 1 g/ml en solución fisiológica y diluciones 1/10 y 1/100. Como control se empleó una suspensión de las levaduras frescas crecidas en el mismo sustrato. En cada caso se realizó conteo al microscopio con Azul de metileno y recuento de unidades formadoras de colonias (UFC) en placas de agar YGC. Las suspensiones fueron analizadas en el sistema reportero de células epiteliales Caco-2-ccl20:luc en el que el gen de la luciferasa se encuentra bajo el control del promotor de la quimoquina CCL20 que presenta una correlación directa entre el aumento de luminiscencia y la actividad inflamatoria inducida por flagelina de Salmonella. 391Para una misma suspensión de levadura deshidratada el número de microorganismos viables determinados en placas de Petri fue de tres órdenes de magnitud menor que el recuento de células vivas incoloras contadas con Azul de metileno. Sin embargo, para un cultivo fresco no se observaron diferencias en los conteos. En los controles se observó que 107UFC/ml redujeron un 95% la respuesta inmune innata epitelial, siendo coincidente con el conteo realizado mediante azul de metileno. En el caso de las levaduras secas, si bien y al igual que en el control, para las cuatro cepas ensayadas fueron necesarias 107 y 106 UFC/ml para disminuir la respuesta inflamatoria en un 95% y 50% respectivamente, para lograr una modulación equivalente se debieron emplear 1010 levaduras vitales/mL contadas al microscopio.Pudo observarse que luego del estrés causado por la deshidratación, aunque muchas células permanecen metabólicamente activas, sólo el 0,1% mantienen su capacidad de duplicarse siendo esta una condición necesaria para su actividad inmunomodulatoria. Estos resultados tienen importantes implicancias en el método de conservación que se seleccione para la comercialización de levaduras cuando se pretende preservar su capacidad modulatoria de la respuesta inmune innata.