Estudio de la interacción entre levaduras aisladas de kefir y Clostridium difficile in vitro

DIOSMA G; TREJO, F; PÉREZ, P.; DE ANTONI G; GARROTE, G L

Rosario, Argentina

Jornada; las XIII Jornadas Argentinas De Microbiología 2008; 2008

La utilización de levaduras como probióticos humanos se encuentra en los primeros estados de desarrollo, sin embargo la experiencia ha demostrado el éxito del empleo de Saccharomyces boulardii en el tratamiento de diarreas asociadas a antibióticos y colitis recurrentes por Clostridium diffícile. El kefir es una leche fermentada de la cual se han reportado propiedades promotoras de la salud y en la cual se encuentran además de bacterias ácido lácticas, diferentes especies de levaduras que constituirían una población potencialmente probiótica a considerar. El objetivo del presente trabajo fue analizar la capacidad de cepas de levaduras aisladas de kefir de antagonizar el crecimiento, la adhesión a enterocitos y el efecto biológico sobre células Vero de C. difficile mediante ensayos in vitro. Se seleccionaron cuatro cepas de levaduras capaces de mantener la viabilidad luego de ser sometidas durante 2 h a pH 2,5 a 37°C y resistir el tratamiento con sales biliares al 1%. Se estudió en medio líquido la capacidad de sobrenadantes de cultivo de Kluyveromyces marxianus CIDCA 8154, S. lypolytica CIDCA 8112 y S. cerevisiae CIDCA 81103 aisladas de gránulos de kefir y S. boulardii aislada de un probiótico comercial, para inhibir el desarrollo de la cepa C. diffícile 117 proveniente de una muestra clínica. Se ensayaron diferentes concentraciones de los sobrenadantes no observándose disminución del crecimiento del patógeno en ninguno de los casos. Se analizó asimismo la influencia de la presencia de levaduras sobre la capacidad de adhesión de C. difficile ATCC 9689 a enterocitos. Para ello se incubaron células Caco-2/TC7 durante 1 hora con una suspensión DO=2 de levaduras a 37º C y en atmósfera de 5% de CO2 en forma previa a la incubación con la suspensión de C. difficile y posteriormente se realizó coloración de Gram y recuento de bacilos al microscopio. Se detectó que la preincubación con levaduras disminuye entre un 55% (CIDCA 81103) y un 75% (CIDCA 8154) la adhesión de C. difficile a enterocitos in vitro. Asimismo, mediante observación microscópica y tinción con cristal violeta se observó una disminución del daño producido sobre células Vero en cultivo al ser tratadas con sobrenadantes de C. difficile desarrollado en medio condicionado por el crecimiento de S. boulardii y K. marxianus CIDCA 8154 con respecto al control sin condicionar. De esta manera, los resultados muestran la capacidad de ciertas levaduras aisladas de kefir de antagonizar la interacción de C. difficile y células en cultivo así como de reducir el efecto citotóxico de los sobrenadantes de dicho patógeno.