Efecto antagónico de proteínas de capa S de Lactobacillus kefir sobre la adhesión e invasión de Salmonella sp a células intestinales in vitro

GOLOWCZYC M A; MOBILI P; GARROTE G L; ABRAHAM A G; DE ANTONI G L

La Plata, Argentina

Congreso; II Congreso Argentino de Microbiología General; 2005

Sociedad Argentina de Microbiología General

Experimentos in vitro han demostrado que ciertas cepas de bacterias lácticas tienen la capacidad de proteger contra la acción de microorganismos patógenos. Este efecto se asocia al "efecto barrera" generado por bacterias con capacidad probiótica que adhieren al epitelio intestinal y/o a la producción de metabolitos tales como los ácidos orgánicos que disminuyen el pH e inhiben el desarrollo de patógenos. Lactobacillus kefir es un microorganismo GRAS potencialmente probiótico que posee capa-S sobre su superficie. Las proteínas de capa-S, secretadas al medio de cultivo o extraídas con agentes caotrópicos, tienen la capacidad de auto-ensamblarse sobre superficies inertes, membranas lipídicas y liposomas. El objetivo de éste trabajo fue estudiar si la proteína de capa-S secretada al sobrenadante de cultivo o extraída de cepas de L kefir tiene actividad inhibitoria contra la acción de Salmonella sobre células intestinales in vitro. Se utilizaron 8 aislados de Lactobacillus kefir, provenientes de gránulos de kefir y una cepa de Salmonella aislada de una muestra clínica. Los aislados de L. kefir fueron seleccionadas por su adhesión a células y por su capacidad de co-agregar con Salmonella sp. Los lactobacilos fueron crecidos en caldo MRS durante 48 hs y los sobrenadantes (SNs) se obtuvieron por filtración. La proteína de capa-S fue extraída con LiCl 5 M, dializada y liofilizada. Para los ensayos de adhesión e invasión se usaron células Caco-2/TC-7 de crecimiento confluente (pasaje 23-28). Los resultados mostraron que la adhesión de L. kefir a las células intestinales en cultivo no afecta ni la adhesión ni la invasión de Salmonella y es independiente de su capacidad de co-agregar con este microorganismo. El pretratamiento con los SNs de 5 de los aislados estudiados no afectó la adhesión pero si impidió la invasión del patógeno. Estudios con un SN artificial (MRS con igual pH y concentración de ácido láctico que los SNs de cultivos L. kefir) adicionado con proteína de capa-S extraída de la superficie de las cepas estudiadas mostró un efecto inhibitorio dosis-respuesta sobre la invasión de Salmonella. Teniendo en cuenta que el pretratamiento con SN artificial sin proteína de capa-S adicionada no afecta la invasión de Salmonella, podríamos concluir que la proteína de capa-S estaría involucrada en el mecanismo de inhibición de la invasión a células intestinales in vitro. Los estudios realizados mediante microscopía electrónica de barrido indican que la Salmonella preincubada con proteínas de capa-S no altera la estructura de las células Caco-2/TC-7. Sin embargo, Salmonella preincubada en iguales condiciones pero sin proteína de capa-S produce una alteración y desorganización de las microvellosidades.