Detección de proteínas relacionadas con el transporte de sodio en una línea celular de coriocarcinoma humano (BeWo)

DEL MÓNACO, S.; DAMIANO, A.; ZOTTA, E.; IBARRA, C.; KOTSIAS, B.

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica y otras

Nuestro trabajo consiste en la detección molecular del canal epitelial de Na+ ENaC y la proteína APXL (Apical protein of Xenopus Like), relacionada con el transporte de Na+, en la línea celular BeWo derivada de coriocarcinoma humano. Ya demostramos la presencia de ENaC y APXL en sinciciotrofoblasto de placenta humana. Cambios en la expresión de las mismas pueden estar relacionadas con la patogenia de hipertensión arterial inducida por el embarazo (preeclampsia). Para analizar con técnicas electrofisiológicas la función que cumplen estas proteínas utilizaremos a las células BeWo como modelo de transporte placentario. Se purificó ARN total de células BeWo, placentas normales y preeclámpticas. Por RT-PCR, utilizando oligonucleótidos específicos para las tres subunidades (alpha, beta y gamma) del ENaC y APXL, analizamos la expresión de las proteínas en la línea celular. Los resultados revelaron que aENaC y APXL se sintetizan en estas células. El tratamiento de las células con vasopresina 10-7 M (6 horas) no modificó este patrón de expresión. Con un western blot de proteínas de membrana de células BeWo, utilizando un anticuerpo policlonal anti-APX se observó una importante banda de ~160 kDa, similar a la proteína APXL de retina humana. Con una RT-PCR semicuantitativa detectamos una disminución cercana al 50% en la relación APXL/actina en ARN total de placentas preeclámpticas (n = 2) con respecto a placentas normales (n = 3), (0.22 ± 0.012 y 0.59 ± 0.35, respectivamente).