OPTIMIZACIÓN DE UN MÉTODO PARA CUANTIFICAR LA ACTIVIDAD KILLER DE LEVADURAS DE LA REGIÓN NOROESTE

MIGUEL FERNÁNDEZ DE ULLIVARRI; LUCÍA M. MENDOZA; MARTA E. FARÍAS

Tucumán, Argentina

Jornada; XI Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores “Augusto Palavecino”; 2010

Introducción: Ciertas cepas de levaduras son capaces de producir toxinas proteicas o glicoproteicas denominadas toxinas killer que pueden matar o inhibir a otros microorganismos. Existe un interés creciente en el uso de levaduras killer como cultivos iniciadores de fermentación, relacionado a su posible predominio durante el proceso de vinificación para la obtención de productos fermentados de calidad controlada. Por ello es necesario el desarrollo de un método sencillo y confiable que permita evaluar este fenotipo. Objetivo: optimizar un método para cuantificar la actividad killer de cepas de Saccharomyces cerevisiae autóctonas de bodegas del Noroeste para la selección de  potenciales cultivos iniciadores y agentes de biocontrol enológico. Materiales y métodos: La actividad killer de las levaduras sacaromicéticas preseleccionadas por el método en placa se cuantifica cultivando las levaduras en caldo YPD-MB (pH 4,2) durante 96 h a 18 ºC. Los sobrenadantes de las 5 cepas autóctonas y la cepa de referencia (S. cerevisiae tipo K1) se esterilizan por filtración. Como control se usa medio sin fermentar. Los medios se inoculan con la cepa sensible S. cerevisiae P351. Se toman muestras a 8, 24 y 48 h de incubación para determinar la población celular y la actividad killer se calcula como % Reducción de células viables y % Reducción de peso seco. Resultados: Independientemente del tiempo de incubación todas las cepas muestran actividad lítica, presentando la cepa Cf8 la mayor la actividad killer (77%). A 8 h de incubación la actividad de las otras cepas varía entre 0 y 32%. Después de 48 h la actividad es superior al 90% en todos los casos. Ensayos en placa solo permiten semicuantificar la actividad killer de los sobrenadantes. Conclusiones: el método permite evaluar una cinética de inhibición en el tiempo de forma rápida y sencilla, lo cual no puede evaluarse mediante ensayos en placa. Asimismo el método permite una comparación mas eficiente del potencial killer entre cepas para su selección, evidenciando que la cepa Cf8 presenta mayor actividad en el tiempo.