EVALUACION DEL EFECTO DE INTERMEDIARIOS DE LA BIOSINTESIS DE VITAMINA B12 EN SU PRODUCCION POR BACTERIAS LACTICAS

VANNINI, VERÓNICA; GIANNI, KATIA; FONT DE VALDEZ, GRACIELA; TARANTO, MARIA PIA; SESMA, FERNANDO

Buenos Aires

Congreso; Xii Congreso Argentino de Microbiología. VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica – SADEBAC. I Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

La cobalamina (vitamina B12 o CBL) es una macromolécula no polimérica cuya estructuracontiene un anillo tetrapirrólico ligado a un átomo de cobalto, denominado anillo de corrina.Además presenta una base como ligando axial inferior, el dimetilbenzaimidazol (DMB), y unligando superior (adenosil), ambos ligados al átomo de cobalto. Su síntesis es compleja, e involucraal menos 25 enzimas diferentes y se halla restringida a ciertas especies bacterianas y arqueas.Estudios previos en nuestro laboratorio demostraron que Lactobacillus (Lb.) reuteri CRL 1098 escapaz de producir cobalamina (y su variante pseudo-CBL) y se caracterizó el operón Cobinvolucrado en su síntesis. Asimismo los extractos celulares (EC) de Lb. curvatus CRL 1000, Lb.coryniformis CRL 1001 y Lb. murinus CRL 1104 presentaron actividad de tipo cobalamina.En base a los resultados previos, el objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de variosintermediarios de la vía biosintética de B12 en su producción, por las diferentes cepas de lactobacilospreviamente mencionados.Se evaluó la producción de CBL por las cepas Lb. reuteri CRL 1098, Lb. curvatus CRL 1000, Lb.coryniformis CRL 1001 y Lb. murinus CRL 1104, en presencia de diferentes precursores de su síntesis: ac.
-aminolevulinico (ALA) (25ng/ul), porfobilinógeno (25ng/ul), uroporfirinógeno III(25ng/ul), CoCl2 (25ng/ul), DMB (20ng/ul) y O-fosfotreonina (50ug/ul) y en medios de cultivo libres de la vitamina. Una estimación del contenido en B12 se llevó a cabo inicialmente mediante un ensayo biológico utilizando la cepa mutante en la enzima metionina sintasa independiente de cobalamina, Salmonella enterica serovar Typhimurium AR2680 (metE cbiB) y a continuación se cuantificó el nivel de la vitamina obtenida en cada una de las condiciones ensayadas empleando un inmunoensayo enzimático (RIDASCREEN-FAST Vitamin B12, R-Biopharm). Todos los ensayos fueron realizados por triplicado. Los resultados indican que Lb. reuteri CRL 1098 y Lb. coryniformis CRL 1001 presentan los mayores niveles de producción de cobalamina (25-35 ug/L y 20-30 ug/L respectivamente) y con relación a los intermediarios, se observó que la adición de O-fosfotreonina incrementó la producción de la vitamina en ambas cepas, mientras que el agregado de ALA y CoCl2 afectaron positivamente la producción de este compuesto por CRL 1098. El porfobilinógeno tuvo un efecto negativo en la síntesis de esta vitamina para ambas cepas. Los demás intermediarios no presentaron efectos significativos sobre la biosíntesis de esta vitamina.Las cepas Lb. murinus CRL 1104 y Lb. curvatus CRL 1000 presentaron valores de B12 entre 0,5 y 2 ug/L. No se observó diferencia significativa en la producción de vitamina B12 con el agregado de los intermediarios ensayados, lo cual podría deberse a los bajos niveles en la producción.En vista de los resultados expuestos, podemos concluir que Lb reuteri CRL 1098 y Lb coryniformis CRL 1001 son cepas potencialmente aplicables en el desarrollo de alimentos bio-enriquecidos en vitamina B12.