Análisis predictivo del efecto fisiopatogénico de variantes de signifcado incierto: Ejemplo de mutaciones pequeñas en marco presentes en pacientes con DMD/DMB

LUCE LEONELA; MAZZANTI, CHIARA; CARCIONE, MICAELA; SZIJAN IRENE; FLORENCIA GILIBERTO

Congreso; 17 CONGRESO INTERNACIONAL DE MEDICINA INTERNA DEL HOSPITAL DE CLÍNICAS, ¨JOSÉ DE SAN MARTÍN¨ DE LA UBA; 2018

Análisis predictivo del efecto fisiopatogénico de variantes de signifcado incierto: Ejemplo de mutaciones pequeñas en marco presentes en pacientes con DMD/DMBObjetivo: La Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) y la Distrofia Muscular de Becker (DMB) son enfermedades recesivas ligadas al cromosoma X y generadas por alteraciones moleculares en el gen DMD. DMD consiste en una distrofia severa, causada por la ausencia de la proteína Distrofina. En cambio, DMB es menos frecuente y menos severa, originada por alteraciones cuanti/cualitativas de la Distrofina. Las mutaciones descriptas en el gen DMD incluyen grandes deleciones/duplicaciones en el 80% de los casos y mutaciones pequeñas/puntuales en el 20% restante. La ?Teoría del Marco de Lectura? establece una correlación entre la mutación y el fenotipo del paciente, la cual se cumple en 92% de los casos. De acuerdo a esta teoría, mutaciones que generan corrimiento del marco de lectura se asocian a DMD, mientras que aquellas que lo mantienen conllevan a un fenotipo leve (DMB). Puesto que la pesquisa de mutaciones puntuales se realiza mediante metodologías de secuenciación masiva en paralelo (NGS), con mayor frecuencia se obtienen variantes de significado incierto (VUS) que deben ser validadas. El objetivo del presente trabajo es brindar herramientas para su análisis. Materiales y Métodos: Se analizó por la técnica de MLPA una cohorte de 175 pacientes con diagnóstico clínico de DMD/DMB, 40 de ellos también estudiados por Secuenciación de Exoma Completo. También, se empleó secuenciación de Sanger, análisis informático predictivo del efecto de las variantes y modelado molecular. Resultados: Entre la población estudiada se destacan 2 pacientes con cuadros de DMD, portadores de mutaciones pequeñas en marco (c.10101_10103delAGA y c.120_131delCTTCAGTGACCT). Dada la discrepancia con el fenotipo esperado por la ?Teoría del Marco? y la ausencia o escasos reportes previos de pacientes con estas mismas alteraciones moleculares, se emplearon 2 estrategias con el fin de aumentar la certeza del predicho efecto patogénico. Por una lado, un estudio de segregación intrafamiliar de la mutación y, por el otro, un modelado de la mutación de modo de establecer su consecuencia en la estructura y funcionalidad de la proteína. Conclusiones: El presente trabajo comparte distintas estrategias para la validación del efecto patogénico de variantes de significado incierto, uno de los mayores desafíos en la interpretación de los datos de la secuenciación masiva en paralelo.