INVESTIGADORES
GILIBERTO Florencia
congresos y reuniones científicas
Título:
Caracterización y análisis molecular de deleciones en 400 pacientes con diagnóstico muscular de Duchenne/Becker
Autor/es:
FERREIRO V, ; F GILIBERTO ,; L FRANCIPANE, ; G FRECHTEL
Lugar:
Buenos Aires Argentina.
Reunión:
Congreso; 12 ° Congreso Internacional de Medicina Interna del Hospital de Clínicas; 2008
Resumen:
La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es una de
las enfermedades hereditarias más frecuentes
(1:3500). Es recesiva, ligada al X, progresiva y de
evolución fatal. La distrofia muscular de Becker
(DMB) es menos frecuente y más leve. Las
DMD/DMB se deben a mutaciones, principalmente
grandes deleciones, en el gen de la distrofina (locus
Xp21). La diferencia molecular entre las DMD/DMB
es la presencia (DMD) o ausencia (DMB) de
corrimiento del marco de lectura (CML). En la
actualidad no existe ningún tratamiento conocido
que cure la DMD, ni que evite el deterioro muscular.
La demanda cada vez más imperiosa del hallazgo
de una cura, promovió que en la actualidad se
establecieran numerosas líneas de investigación en
el campo de la terapia génica. La más prometedora
es el uso de oligonucleótidos antisentido (OAS).
Mediante la hibridación con un OAS de una
secuencia blanco en el ARNm se ha tratado de
restaurar el marco de lectura a expensas de la
pérdida de secuencias codificantes.
El objetivo del presente trabajo es caracterizar
deleciones en los pacientes con diagnóstico clínico
de DMD/DMB y predecir cuál sería el mejor blanco
para la terapia génica antisentido que permitiría
transformar el fenotipo DMD en DMB o incluso en
asintomático en el mayor número de pacientes.
Se analizaron 400 pacientes con diagnóstico clínico
de DMD/DMB y 3 individuos asintomáticos. La
identificación de la deleción se realizó por PCR
multiplex, utilizando 4 reacciones cuadruplex para la
amplificación de 16 exones. La confirmación de la
presencia de una deleción y el análisis de su
extensión se realizó por medio de PCR simplex de
los exones faltantes y de los contiguos a los
mismos. Se verificó la conservación del marco de
lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
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un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.
lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
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lectura mediante el análisis de la secuencia
resultante luego del empalme de los exones
flanqueantes a la deleción. Con el fin de evaluar
cuántas de las deleciones con CML en pacientes
con DMD serían rescatadas mediante una terapia de
salteo de exones, se seleccionaron y analizaron las
deleciones sin CML encontradas sólo en los
pacientes con fenotipo de DMB.
Con este diagrama de trabajo se hallaron deleciones
en 186 pacientes, en 106 de ellos fue posible
interpretar las consecuencias fenotípicas de las
alteraciones moleculares halladas (22 sin CML y 84
con CML). De las 22 deleciones sin CML, la que
abarca los exones 45-55 resultó el mejor blanco
para la terapia génica antisentido.
Se propone la deleción de los exones 45-55 como
mejor candidata para el desarrollo de una única
estrategia de terapia génica antisentido, ya que el
generar dicha deleción permite corregir el marco de
lectura en la mayor cantidad de pacientes con DMD.
De esta manera podría tratarse el 45% de todos los
DMD con deleciones en el gen de la distrofina
diagnosticados en nuestro laboratorio. Se quiere
demostrar la importancia del hallazgo y
caracterización de deleciones en pacientes con
DMD, con el objeto de conocer la alteración que dio
origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
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un futuro a la corrección específica del defecto
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origen al fenotipo patológico, para poder acceder en
un futuro a la corrección específica del defecto
genético de cada afectado en particular.