DE METODOLOGIA BASADA EN EL USO DE UN PRIMER UNIVERSAL PARA EL DIAGNOSTICO DE DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE/BECKER

MASSOT F.; FERREIRO V.; PIAZZA G. ; SZIJAN I. ; GILIBERTO F

Congreso; Congreso SAIC SAFIS SAFE 2010; 2010

La Distrofia muscular de Duchenne/Becker es una de las enfermedades hereditarias más frecuentes (1:3500), es recesiva, ligada al X, progresiva y de evolución fatal. Se produce por mutaciones en el gen de la distrofina, de las cuales el 70% son grandes deleciones. Nuestro objetivo fue diseñar una metodología basada en el uso de un primer universal marcado con fluorocromo (FAM) para ser utilizado en dos diferentes estudios: PCR semicuantitativa y segregación de alelos intrafamiliar. La PCR semicuantitativa tiene el objeto de detectar mutaciones tanto en pacientes varones como en mujeres portadoras. La segregación de alelos de STRs se realiza en las familias afectadas para estimar el riesgo de contraer o transmitir la enfermedad. Se utilizan 3 primers para amplificar cada loci: 1) primer forward de secuencia específica con una colita de secuencia M13 en su extremo 5´; 2) primer reverse de secuencia específica; 3) primer M13 marcado con FAM. Se diseñó una PCR semicuantitava octuplex, de exones ubicados en "sitios calientes" de deleción. Se obtuvieron resultados en los rangos de dosis esperados (0.5 y 1) para muestras de mujeres control con y sin deleción, revelando una deleción heterocigota en una mujer. En el estudio de segregación de STRs se analizaron 4 familias, con un total de 21 muestras (12 caracterizadas previamente por otra metodología), realizándose 51 amplificaciones de STRs de hasta 6 loci diferentes. Los electroferogramas obtenidos permitieron los siguientes diagnósticos: 3 mujeres resultaron portadoras y 9 se excluyeron de serlo; 1 vellosidad coriónica se excluyó de portar la mutación. Se evidenciaron dos eventos de mutación de novo y un mosaicismo germinal en una mujer. La utilización de primer universal disminuye los costos de los estudios haciéndolos accesibles para mas pacientes. El desarrollo de nuevas metodologías permite generar diversas estrategias diagnósticas adecuadas para cada familia.