“ANALISIS MOLECULAR Y DE SEGREGACION DE POLIMORFISMOS DEL GEN RB1 EN PACIENTES CON RETINOBLATOMA Y SUS FAMILIARES.”

PIAZZA G. ; OTAVIANI D. ; FERRER M. ; GILIBERTO F. ; MASSOT F. ; SZIJAN I.

Congreso; Congreso SAIC SAFIS SAFE 2010; 2010

El retinoblatoma (RB), cáncer de la niñez, puede ser hereditario (40%) con alta penetrancia (90%) o no hereditario (60%) originándose por mutaciones en el gen RB1 (13q14). Es importante identificar la mutación para detectar a individuos susceptibles al RB y aplicar un tratamiento temprano. El objetivo es identificar mutaciones en 7 familias con RB, 1 con historia familiar, por medio de: i) Segregación de polimorfismos, para determinar haplotipo de riesgo y detectar grandes deleciones  y ii) Método de heteroduplex/secuenciación para pequeñas mutaciones. I) Se utilizaron  5 polimorfismos intragénicos: 3 RFLPs, un STR y un VNTR. Ii) Se realizó PCR/heteroduplex/secuenciación de Promotor, 27 exones y región poliadenilada de RB1. Además se detectaron mutaciones previas usando enzimas de restricción. El análisis de segregación de polimorfismos detectó una deleción en la región 5´ del gen en uno de los casos  y el haplotipo de riesgo en otro, permitiendo excluir a dos familiares. El análisis de secuenciación, en otra familia, identificó una sustitución de base G por A en posición 5 aguas arriba del extremo 3´ del exón 21: g.165094G>A, importante para un correcto empalme de exones.  Mediante el rastreo de mutaciones previamente detectadas se excluyo del riesgo a dos niñas recién nacidas. En el primer caso se excluyo a la hermana del afectado por secuenciación y ausencia de la mutación g.160733delA en el exón 21. En el segundo se excluyo a la hija de la afectada por medio del análisis restricción con la enzima DdeI, ya que una mutación en el exón 18 genera un sitio de corte, el análisis no evidencio bandas de digestión enzimática. Conclusión: Mediante el uso de diversas herramientas de análisis molecular se pudo determinar la presencia de dos mutaciones responsables del desarrollo de RB, una gran delecion de la región 5´ del  gen y una alteración en la 5ª base de la secuencia consenso dadora para empalme de exones y fue posible excluir a 4 familiares del riesgo.