Detección de deleciones y duplicaciones en el gen de la distrofina en afectados y portadoras de Distrofia Muscular de Duchenne/Becker mediante la técnica de MLPA

D. MARZESE, ; L GOMEZ, ; AL VARGAS, ; V FERREIRO, ; MI ECHEVERRIA, ; . F GILIBERTO,; M ROCKE

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LII Reunión de la SAIC y de la SAI SAFIS; 2007

Detección de deleciones y duplicaciones en el gen de la distrofina en afectados y portadoras de Distrofia Muscular de Duchenne/Becker mediante la técnica de MLPA D. Marzese, L Gomez, AL Vargas, V Ferreiro, MI Echeverria, F Giliberto, M Rocke. La Distrofia muscular de Duchenne/Becker, es una enfermedad asociada a mutaciones en el gen DMD ubicado en el cromosoma Xp21. Entre un 60-70% de las alteraciones corresponden a deleciones y/o duplicaciones que pueden detectarse por PCR sólo en los afectados y no en portadoras, por no ser una técnica cuantitativa. El objetivo de este trabajo fue validar y aplicar la metodología multiplex ligation probe amplification (MLPA) en doce muestras de pacientes y de portadoras de distrofia muscular de Duchenne/Becker. Siete muestra de ADN con previo diagnóstico de deleciones/duplicaciones realizado por segregación de STRs fueron incluidas en este estudio. La metodología MLPA consistió en la utilización de 40 pares distintos de sondas adyacentes y ligadas  a cada exón del gen DMD y posteriormente amplificadas en conjunto por PCR. Los productos fueron separados por electroforesis capilar y analizados con un software específico. En el 100% de las muestras con diagnóstico previo, MLPA confirmó los resultados. En tres de las siete muestras (un varón afectado y dos probables portadoras) el tamaño de la deleción detectado por MLPA fue idéntico al hallado por STRs y de las 4 muestras restantes, se encontró que las deleciones abarcaban más exones. En cinco muestras sin estudios moleculares previos se diagnostico una portadora de una deleción y un varón afectado con una duplicación. Los resultados obtenidos permitieron validar la metodología MLPA para detectar alteraciones en el número de las copias de uno o más exones del gen DMD en pacientes y portadoras. Establecer el estado de portadora permitió realizar el asesoramiento correspondiente y al delimitar la alteración molecular se pudo analizar el marco de lectura del gen y así predecir el fenotipo Duchenne o Becker de los afectados. La metodología es sensible, específica, rápida y su aplicación amplía las posibilidades de diagnóstico genético molecular en nuestro país.