Simposio de Enfermedades ligadas al X: “Estudios moleculares para Distrofia Muscular de Duchenne

VERÓNICA FERREIRO, , ; FLORENCIA GILIBERTO; NOELIA GRACÍA MUÑIZ ; IRENE SZIJAN

Buenos Aires, Argentina.

Simposio; 36º Congreso Argentina de Genética. SAG (Sociedad Argentina de Genética; 2007

Estudios moleculares para distrofia muscular de Duchenne La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es causada por mutaciones en el gen distrofina, de 2.3 Mb en Xp21.2, incluyendo grandes deleciones (60%), duplicaciones (10%) y pequeñas mutaciones (30%). Como no existe cura ni tratamiento efectivo es importante prevenir la enfermedad por asesoramiento genético que depende de la detección de portadoras. Dos tercios de casos DMD son familiares y las mujeres son candidatas a la determinación del riesgo, siendo el diagnóstico molecular el mas seguro. Para ello existen varias técnicas. La identificación de deleciones en el paciente es importante para detección de portadoras, pero debido a dificultades en un análisis directo de exones en mujeres se usa el análisis indirecto basado en segregación polimórfismos. Este método es informativo en casos familiares y menos en esporádicos, para ellos se está desarrollando un método de PCR fluorescente semicuantitativa. Además, se está validando un método desarrollado por otros, amplificación por PCR multiplex de sondas hibridizadas a exones y ligadas (MLPA). El análisis de exones por PCR multiplex en 316 pacientes identificó deleciones en el 45%, su distribución fue mayormente en el centro y 5´ del gen y su efecto sobre el marco de lectura se correlacionó bien con el fenotipo severo o leve de enfermedad. El análisis de habilidades cognitivas de pacientes con DMD indicó que las deleciones localizadas en el centro y 3´ del gen eran asociadas preferentemente con retraso madurativo. La segregación de repeticiones cortas en tandem [STR-(CA)n] se usó para conformar haplotipos de pacientes y familiares, identificar el haplotipo de riesgo y determinar el estado portador. Se estudiaron 90 familias con mas de 400 individuos por medio de hasta 11 polimorfismos. Se determinó el estado de portadora o no-portadora en el 75% de mujeres de casos familiares con una certeza del 95-100% y se excluyó del riesgo al 32% de familiares de casos esporádicos con la misma certeza. El análisis de STRs permitió también detectar grandes deleciones , tanto en varones como en mujeres, fue informativo en familias sin afectado vivo y para diagnosticar DMD en mujeres sintomáticas. La determinación del estado portador resultó importante para predicción del riesgo de DMD en análisis prenatal de 18 muestras de vellosidades coriónicas. Otros eventos genéticos revelados por análisis de STR fueron: i) 13 recombinaciones identificadas en el ~5% de meiosis, en familias con DMD; ii) Mosaicismo germinal detectado en 2 portadoras; iii) Cambios de longitud de STR-(CA)n durante transmisión de padres a hijas, incluyendo 3 retracciones y 1 elongación con una frecuencia del 0.004. El análisis de polimorfismos STR resultó una buena herramienta en el diagnóstico molecular de familias con DMD. Con el objeto de aumentar la informatividad del diagnóstico molecular se validó el método de MLPA con muestras de pacientes y portadoras ya analizadas por STR obteniéndose resultados coincidentes. También hay resultados preliminares del método de PCR multiplex fluorescente semicuantitativa. Ambos métodos posibilitan el análisis de grandes deleciones/duplicaciones y pequeñas deleciones/inserciones tanto en varones como mujeres de familias con DMD.