ANÁLISIS DE UNA VARIANTE DE SPLICING EN DMD Y SU IMPACTO A NIVEL DEL ARNM

CARCIONE, MICAELA;; MAZZANTI, CHIARA; LEONELA LUCE; GILIBERTO, FLORENCIA

Jornada; Jornadas Argentinas de Genética 2021; 2021

TítuloANÁLISIS DE UNA VARIANTE DE SPLICING EN DMD Y SU IMPACTO A NIVEL DEL ARNMMazzanti, Chiara1,2; Luce, Leonela1,2; Carcione, Micaela1,2; Giliberto, Florencia1,2*.1 Laboratorio de Distrofinopatías, Cátedra de Genética, Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.2 Instituto de Inmunología, Genética y Metabolismo (INIGEM), CONICET - Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina.Las distrofinopatías son enfermedades musculares progresivas poco frecuentes ligadas al X, causadas por mutaciones en DMD. La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es la más frecuente y representa la forma más severa. Si bien la mayoría de las alteraciones que se producen en el gen DMD afecta zonas codificantes, el ~ 7% se encuentran en regiones de splicing. Es difícil predecir el efecto que tendrán dichas variantes en el correcto procesamiento del splicing. Presentamos el caso de un niño de 8 años con distrofinopatía, biopsia con distrofina preservada y un estudio de NGS donde se identificó la variante DMD:c.4519-2A>C (exón 33) como probablemente patogénica. Nuestro objetivo fue analizar la consecuencia del efecto de la variante del sitio aceptor de splicing a nivel de ARNm.Se extrajo ARNm de músculo y se síntetizó ADNc. Se realizaron Long-range y nested PCRs de exones flanqueantes a la variante y se secuenciaron por Sanger.Se evidenciaron dos isoformas de distinto peso molecular. La mayoritaria (A) con una deleción de 14pb, mientras que la otra (B) tenía delecionado el exón 33 completo. La secuenciación permitió predecir que A produciría corrimiento del marco de lectura (CML) con aparición de un codón prematuro de traducción, llevando a la ausencia de producto de proteína distrofina. Por otro lado, se espera que en B no se produzca CML y se genere una proteína distrofina más corta. Dicho hallazgo concuerda con la inmunohistoquímica, donde se describen los dominios DYS 1, 2 y 3 preservados. La presencia de la isoforma B, cuyo producto generaría una distrofina más corta, pero parcialmente funcional, explicaría el cuadro más leve observado en el paciente. Como conclusión, el estudio del ARNm permitió corroborar el impacto deletéreo de la variante a nivel del splicing, permitiendo establecer una correlación entre dicha alteración, las isoformas de distrofina, el resultado de la biopsia y las manifestaciones clínicas del paciente.