Estudio de la interacción de las proteínas del lactosuero bubalino con ácido fólico mediante fluorescencia

LEANDRO FABIÁN BUSTOS; FRANCO EMANUEL VASILE; ANA MARÍA ROMERO; MARÍA ALICIA JUDIS; OSCAR EDGARDO PÉREZ

Encuentro; Reunión de difusión de la labor docente, científica, tecnológica y de extensión; 2020

El lactosuero generado durante la elaboración de quesos de leche de búfala (Bubalus bubalis) es un subproducto rico en lactosa y proteínas, que puede ser aprovechado para diferentes aplicaciones. Una de ellas constituye el desarrollo de vehículos para el transporte y protección de bioactivos sensibles como el ácido fólico (AF). Esta molécula es la forma sintética de la vitamina B9, esencial para muchas vías metabólicas humanas. Una etapa fundamental en el desarrollo de estos vehículos es la caracterización de la interacción transportador - bioactivo. Por ello, el objetivo de este trabajo fue analizar la interacción de las proteínas del lactosuero bubalino con el AF mediante fluorescencia. Para esto, se prepararon soluciones de AF (0, 5, 10, 20 y 50 µM) en buffer fosfato salino (pH 7,4), conteniendo 20 µM de proteínas de lactosuero bubalino - BWPC (63% de proteínas). Luego, se obtuvieron los espectros de fluorescencia en el intervalo 305 - 400 nm con λex de 280 y 295 nm. En ausencia de AF, las muestras presentaron la máxima emisión a 334 nm (λmax) para ambas λex, consecuencia de la fluorescencia intrínseca de las proteínas. En presencia de AF, la intensidad disminuyó, lo cual se atribuyó a la formación de complejos. En todos los casos, λmax se mantuvo constante, indicando que no hubo modificación del microambiente de los residuos de Trp ni Tyr. El aumento en la concentración de AF produjo una reducción gradual de la fluorescencia, lo cual se ajustó a la ecuación de Stern-Volmer. A partir de esta, se obtuvieron las constantes 2,32x1012 M-1s-1 para λex= 280 nm y 1,92x1012 M-1s-1 para λex= 295 nm. Estos resultados permitieron clasificar al quenching como tipo estático, indicando la formación de complejos permanentes. Estos resultados advierten el potencial uso de BWPC en el desarrollo de sistemas de delivery para esta vitamina.