Análsis conformacional del complejamiento de la vitamina B9 con las proteínas del lactosuero de bubalus bubalis

LEANDRO FABIÁN BUSTOS; FRANCO EMANUEL VASILE; MARÍA ALICIA JUDIS; OSCAR EDGARDO PÉREZ

Jornada; IV Jornadas de investigadores en formación en ciencia y tecnología; 2021

La vitamina B9 es un nutriente esencial para muchos procesos bioquímicos humanos, como la multiplicación celular, la regulación de la actividad de genes, la producción de glóbulos rojos y blancos, etc. Por ello, su incorporación a alimentos y suplementos, bajo la forma de ácido fólico (AF), es una alternativa para lograr concentraciones óptimas en el organismo. Sin embargo, esta vitamina se degrada fácilmente por acción de la luz, el calor o el oxígeno. Entre las estrategias para su protección y delivery, se ha propuesto el complejamiento del AF con proteínas, para lo cual resulta importante caracterizar la interacción ligando-carrier y las modificaciones estructurales que experimenta este último. En este contexto, el objetivo de este trabajo fue evaluar los cambios conformacionales de la fracción proteica del lactosuero de Bubalus bubalis inducidos por unión con el ácido fólico. Para esto, se prepararon soluciones de AF a 0, 0.5, 1, 2, 5, 10 y 20 μM, en buffer fosfato pH 7 conteniendo 5 μM de proteínas del lactosuero bubalino, obtenidas a partir de un concentrado proteico (BWPC) conteniendo 63% de proteínas. Luego, se obtuvieron sus espectros de fluorescencia sincrónica en el rango 290 - 365 nm con Δλ de 15 y 60 nm. Adicionalmente, se registraron sus espectros IR (4000 - 600 cm-1, 4 cm-1, 32 scans) en la modalidad ATR. Se corrigió la línea base de los espectros obtenidos y se sustrajo el espectro del buffer + AF. Seguidamente, se obtuvo el espectro de la 2da derivada (algoritmo de Savitzky-Golay) y se lo cortó a la banda amida I (1.700 - 1.600 cm-1). Finalmente, este espectro se invirtió verticalmente y los picos se ajustaron a funciones gaussianas asociadas a diferentes elementos de la estructura secundaria de las proteínas. Los espectros de fluorescencia sincrónica presentaron una emisión máxima (λmax) a 306 y 335 nm, para los microambientes de las Tyr (Δλ= 15) y Trp (Δλ= 60), respectivamente. La adición de la vitamina provocó el quenching de la fluorescencia, en un 76,7% para Δλ= 15 y 52,8% para Δλ= 60. Además, la λmax de las Tyr se desplazó a valores más altos (red shift), indicando cambios conformacionales y disminución de la hidrofobicidad. La λmax correspondiente al microambiente de los Trp no se modificó con la presencia de la vitamina. La composición de la estructura secundaria de la fracción proteica fue: 69,2% β-sheet, 6,7% β-turn, 2,3% α-helix y 13,6% random. El AF (20 µM) aumentó significativamente (P