Evaluación del perfil de virulencia de Campylobacter termotolerantes aislados de granjas comerciales de pollos parrilleros

ROSSLER, E.; ZIMMERMANN, J.A.; OLIVERO C.R.; SALUZZO, M.; FRIZZO, L.S.; ZBRUN, M.V.; SEQUEIRA, G.; ANTONIAZZI, L.; SIGNORINI, M.L.

Esperanza

Jornada; VII Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión; 2019

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

Campylobacter termotolerante (CT), principalmente Campylobacter jejuni y Campylobacter coli, es el principal agente zoonótico transmitido por alimentos causal de la campilobacteriosis humana. El tracto gastrointestinal del pollo es el principal reservorio de estos microorganismos. Durante el proceso de faena de los pollos, se produce la contaminación de la carne debido al método utilizado para la evisceración. Es así como Campylobacter se transmite al hombre a través del consumo de carne cruda, mal cocida o por contaminación cruzada de los alimentos3 . Los mecanismos moleculares implicados en la infección de CT en pollos podrían ser útiles para conocer características epidemiológicas de la enfermedad1 . Es así que se han descrito algunos genes cuya expresión estaría asociada con la virulencia de CT: flaA, flhA, cadF y racR (genes responsables de la adherencia y colonización de la mucosa intestinal) 2,4 , virB11, ciaB, iam (genes responsables de la invasión) 2,4; cdtA, cdtB y cdtC (genes responsables de la producción de citotoxinas) 2,4 . El objetivo de este trabajo fue analizar la presencia de genes asociados a la virulencia de CT aislados de diferentes fuentes en granjas comerciales de pollos parrilleros. Para ello se trabajó con una colección de aislamientos de CT obtenidos en muestreos sucesivos en tres granjas comerciales de pollos parrilleros durante el año 2015 (C. jejuni n=80 y C. coli n=60). Los aislamientos fueron obtenidos a partir de muestras provenientes de: pollos parrilleros (C. jejuni n=53 y C. coli n=51), aves silvestres (C. jejuni n=20 y C. coli n=6), cascarudos (C. jejuni n=2 y C. coli n=2) y larvas (C. jejuni n=2) de la cama (Alphitobious diaperinus), moscas (Musca domestica) (C. coli n=1) y botas de los operarios de las granjas (C. jejuni n=3). En todos los aislamientos se examinó la presencia de 10 genes relacionados con la virulencia de CT: flaA, flhA, cadF, racR, virB11, ciaB, iam, cdtA, cdtB y cdtC. Para ello, en primer lugar, se realizó la extracción de ADN genómico a partir de una suspensión de cultivo fresco de cada aislamiento. Luego se realizó una reacción de PCR para determinar la presencia de cada gen utilizando secuencias de primers y condiciones de reacción descriptas por varios autores: Konkel et al., 1999 (cadF), Hickey et al., 2011 (cdtA), Korsak et al., 2004 (iam), Muller et al., 2006 (flhA), and Bacon et al., 2000 (virB11), Datta et al., 2003 (flaA, cdtB, cdtC, ciaB, racR). Los resultados demostraron que de los 10 genes analizados, flaA, flhA, fueron detectados en todos los aislamientos evaluados. El tercer gen más prevalente fue cadF (91%). Por otro lado, aproximadamente la mitad de los aislamientos fueron positivos para el cluster cdt (cdtA, cdtB and cdtC) (51%). Para iam y racR las prevalencias fueron del 48% y 46 % respectivamente, la prevalencia de ciaB fue de 32% y la de virB11 11%. Teniendo en cuenta las especies de los aislamientos, para C. jejuni las prevalencias de los genes analizados fueron: 100% flaA y flhA, 93% cadF, 65% cdt, 64% racR, 54% ciaB, 29% iam y 9% virB11. Para C. coli, en cambio, las prevalencias fueron: 100% flaA y flhA, 90% cadF, 38% cdt, 35% racR, 8% ciaB, 82% iam y 17% virB11. Si además se considera la información de la fuente de origen del aislamiento se pudo observar que los aislamientos de C. jejuni y C. coli provenientes de aves silvestres presentaron el mismo patrón de genes que los aislamientos de la misma especie obtenidos en pollos. La prevalencia del resto de los genes fue muy variable entre las diferentes fuentes de aislamiento. Solo una cepa aislada, obtenida a partir de mosca fue positiva a todos los genes de virulencia analizados. De los resultados obtenidos observamos que los genes relacionados a la expresión de adherencia y colonización de CT fueron encontrados con mayor frecuencia que el resto. La alta prevalencia de genes que codifican proteínas involucradas en la movilidad de CT indica el importante rol de los productos de estos genes en la virulencia de CT y revela una relación entre la movilidad y la virulencia2,4 . El gen cadF tuvo una elevada prevalencia en aislamientos provenientes de pollos, lo que podría confirmar la importancia del producto de este gen en la colonización por CT del tracto gastrointestinal de estos animales2,4 . Este estudio también mostró diferentes niveles de prevalencia de racR, gen que juega un rol en la colonización del ciego de los pollos por CT. Por otro lado más de la mitad de los aislamientos presentaron los tres genes del cluster cdt los cuales son necesarios para la expresión de la citotoxina activa. Se pudieron observar también diferencias en la prevalencia de los genes cdt, racR, ciaB, iam según la especie del aislamiento. Esto podría demostrar diferencias genéticas que implican mecanismos distintos de colonización, adherencia y patogenicidad entre las especies de Campylobacter termotolerantes. Sumado a esto, el hecho de no encontrar diferencias en las prevalencias de los genes en ambas especies de Campylobacter termotolerantes aislados de distintas fuentes estaría indicando que la presencia de ciertos genes estaría relacionada con la especie del aislamiento y no de la fuente de origen. La virulencia de las bacterias está condicionada por la expresión de genes de virulencia, por lo tanto, la presencia de estos genes determina la capacidad de los aislamientos de CT para adherirse e invadir las células2,4. Debe destacarse que la presencia de factores de virulencia particulares no es evidencia directa de la patogénesis. Sin embargo, sugiere fuertemente que pueden ser potencialmente capaces de producir la enfermedad