Supervivencia de cepas probióticas encapsuladas, destinadas a terneros jóvenes, durante el almacenamiento a diferentes temperaturas

ASTESANA, D.M.; ROMERO SCHARPEN, A.; ROSSLER, E.; FUSARI, M.L.; ZIMMERMANN, J.A.; SIRINI, N. E.; BERISIVIL, A.P.; ROSMINI, M.R.

Casilda

Jornada; II Reunión Transdisciplinaria en Ciencias Agropecuarias 2017; 2017

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional de Rosario

Los probióticos son definidos por la organización mundial de la salud como ?microorganismos vivos, que administrados en un adecuado número, confieren beneficios al hospedador?1. Varios factores como el proceso de producción, las condiciones de almacenamiento y las bio-barreras del hospedador, desafían inevitablemente la supervivencia de las bacterias probióticas. La encapsulación protege a los microorganismos de los daños causados por procesos como el secado, el periodo de conservación y del efecto de las condiciones gastrointestinales3. Para que ejerzan su efecto beneficioso, los probióticos deben estar presentes a un nivel mínimo (NMS) de 6 o 7 log UFC/g en el alimento a consumir o una ingesta diaria mínima de 108 UFC. La utilización de cápsulas de tamaño similar al grano peleteado del alimento iniciador (macrocápsulas), puede facilitar su administración a los terneros junto con la alimentación4. Macrocápsulas (CAP) con altas concentraciones de microorganismos (11 log UFC/CAP), permitirían que con una sola cápsula se administre la ingesta diaria recomendada de probióticos en los terneros. El objetivo de este trabajo fue evaluar la supervivencia de cepas probióticas encapsuladas, almacenadas bajo diferentes condiciones de temperatura. Para llevar a cabo este objetivo, se utilizaron dos cepas del género Lactobacillus (L. casei DSPV 318T y L. plantarum DSPV 354T). Ambas cepas fueron activadas en placas con medio MRS (Man Rogosa Sharpe), a 37ºC por 72 h en anaerobiosis. Luego se realizaron dos cultivos consecutivos, ambas cepas por separado, en caldo MRS a 37ºC durante 16 h. Posteriormente fueron cultivadas, en co-cultivo, en un medio líquido desarrollado en el ?Laboratorio de Análisis de Alimentos del Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICiVet UNL-CONICET)?, el cual contenía: permeado de suero de queso (60 g/l), extracto de levadura 50 (g/l), MgSO4. (0,2 g/l) y MnSO4 (0,003 g/l). Una vez concluido el tiempo de crecimiento del inóculo, el mismo se neutralizó (pH 6,5) con solución de NaOH (6M) estéril y posteriormente fue centrifugado a 4.500 g por 15 min. El sedimento obtenido se resuspendió en suero de queso para obtener una suspensión que contenía aproximadamente 11 log UFC/ml. Posteriormente le fue agregada una solución de alginato de sodio y glicerina en proporción 70:30 con respecto al medio de cultivo. La concentración final en la macrocápsula para el alginato de sodio fue del 2% (P/P) y del 7,5% (V/P) para la glicerina. Esta mezcla fue depositada en moldes de 1 ml y posteriormente almacenados a -20ºC durante 8 h para solidificar el contenido. Posteriormente, fueron sumergidos primero en agua hirviendo durante tres segundos, para despegar las CAP del molde y luego en una solución de 0,1M CaCl2 durante 1 h para que el alginato polimerice. Luego, las CAP fueron recuperadas por filtración y llevadas a freezer -80ºC por 8 h para su posterior liofilización. La misma se llevó a cabo durante 12 h con una presión de 0,06 mbar y una temperatura de -54ºC (Martin Christ ALPHA 1-4 LD plus). Las CAP fueron almacenadas bajo diferentes condiciones de temperatura. Un tercio de las CAP fueron mantenidas a 4 ºC, otro tercio fueron conservadas a temperatura ambiente (TA) y el resto fueron conservadas a -20 ºC. Se determinó la viabilidad de los microorganismos durante 84 días. Para esto, las CAP fueron disueltas con una solución de citrato de sodio (10 g/l) usando un vortex. Posteriormente se realizaron diluciones decimales seriadas en agua peptonada bufferada. A continuación, se sembraron en placas con agar MRS y se incubaron a 37ºC durante 72 h en anaerobiosis. Las determinaciones de viabilidad fueron realizadas previamente a la etapa de congelación, inmediatamente después de la liofilización y secuencialmente a los días 0, 14, 28, 42, 56, 70 y 84. Todas las determinaciones se hicieron por triplicado. En cuanto a los resultados, durante el proceso de liofilización hubo una pérdida significativa de viabilidad bacteriana (P< 0,001). La concentración de probióticos de las CAP antes del proceso de liofilización fue de 11,25 log UFC/CAP y de 11,03 log UFC/CAP luego del mismo, habiendo una pérdida de 0,22 log UFC/CAP Por otro lado, la temperatura de almacenamiento afectó la viabilidad bacteriana a lo largo del tiempo. Las CAP, conservadas en las diferentes temperaturas, tuvieron pérdida de viabilidad a lo largo de los 84 días de ensayo (P