Monitoreo de la cepa Lactobacillus salivarius DSPV 001P mediante tinción con isotiocianato de fluoresceína

BLAJMAN JESICA; ZIMMERMANN JORGE ALBERTO; ROMERO SCHARPEN, A.; ASTESANA DIEGO; ROSSLER EUGENIA; BERISVIL AYELEN; FUSARI MARCIA; ROSMINI MARCELO RAUL; ZBRUN VIRGINA; SOTO LORENA PAOLA; FRIZZO LAUREANO

Esperanza

Jornada; III Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión de la FCV; 2015

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional de Litoral

El conocimiento relacionado al destino de las bacterias probióticas dentro del ambiente complejo de la microbiota intestinal es muy escaso y el estudio de la distribución de estas bacterias in vivo representa un gran desafío. La localización y desplazamiento de los probióticos durante su tránsito por el tracto gastrointestinal (TGI) de los pollos, así como su interacción con el sistema inmune del huésped o con la microbiota indígena han comenzado a ser estudiados, pero aún no están bien entendidos4. Los mecanismos parecen ser complejos y varían entre diferentes preparaciones probióticas. La utilización de herramientas de monitoreo de las cepas probióticas in vivo podría contribuir al entendimiento del mecanismo de acción de estas bacterias relacionando la localización y la carga microbiana con la generación de mejoras en el estado sanitario y la performance de crecimiento de los animales durante la crianza intensiva.El objetivo del ensayo fue monitorear la cepa Lactobacillus salivarius DSPV 001P mediante tinción con isotiocianato de fluoresceína tras su administración a pollos parrilleros.Para el ensayo se utilizó la cepa bacteriana de origen aviar L. salivarius DSPV 001P con propiedades probióticas in vitro. El cultivo fresco de la cepa seleccionada fue centrifugado a 5000 xg durante 10 min y lavado 2 veces con buffer PBS a pH 7,2. El sedimento fue resuspendido con PBS, adicionado de isotiocianato de fluoresceína (FITC) (1mg/ml, Sigma) e incubado durante 2 h a 37ºC en la oscuridad4. Posteriormente, los cultivos fueron centrifugados y lavados 6 veces con buffer PBS hasta la eliminación completa del agente fluorescente. El pellet fue resuspendido en PBS a una concentración final de 1010 UFC/ml. Fueron utilizados 45 pollos parrilleros recién nacidos (en su 1er día de vida). Los pollos fueron divididos en cinco grupos experimentales (cuatro grupos tratados y un grupo control) conformados por nueve animales cada uno. Cada grupo recibió 1 ml de la bacteria fluorescente per os en diferente concentración: 10 Log UFC, 9,5 Log UFC, 8,5 Log UFC y 7,5 Log UFC. Al grupo control se le suministró 1 ml de PBS como placebo. El cuidado de los animales se realizó teniendo en cuenta la Guía para el cuidado y uso de animales en investigación y enseñanza2. Necropsias programadas fueron realizadas a tres pollos de cada grupo experimental (15 pollos totales), sacrificados mediante dislocación cervical, a tres tiempos diferentes post administración del probiótico: 30 min, 6 h y 12 h. Se recogieron los siguientes órganos: hígado, páncreas, buche, duodeno, ciego y bolsa de Fabricio utilizando instrumental estéril en cada tejido para minimizar la posibilidad de contaminación bacteriana entre muestras. Los órganos fueron procesados mediante la técnica histológica de Saint Marie3, con algunas modificaciones. El montaje se realizó con bálsamo de Canadá. El monitoreo y la interacción de las bacterias marcadas con FITC se estudió bajo luz azul en un microscopio de fluorescencia (400 X) (Eclipse CI, Nikon). Las imágenes fueron tomadas con una cámara fotográfica digital (DCM900, ScopeTek) empleando el software de captura Minisee versión 1.1.3.0 para Windows.