CMC-962-19 Modelo murino profiláctico de L. plantarum frente a una infección con C. coli.

RUIZ, JULIA; PANZANI, CAROLINA; ORTEGA, HUGO; FRIZZO, LAUREANO

2020-02-03/2020-03-16

Biológica

Sanidad animal-Enfer. infec. bacterianas

Objetivo: Evaluar el efecto protector de bacterias ácido lácticas de origen porcino para evitar o disminuir la diseminación de Campylobacter coli verificando su accionar en el modelo experimental de colonización.Metodología y técnica: Se utilizaron 45 ratones hembra de la cepa Balb/c Cmedc de 6 semanas de edad. Los animales se dividieron en 3 grupos de 15 individuos cada uno: CT, CAMPY, PROCAMPY. Los animales utilizados en el estudio fueron producidos en el CMC. Identificación. Los animales fueron alojados en jaulas por grupo según POE GC-031 e identificados con un número entero correlativo, siguiendo las indicaciones del POE GC-059. Manejo: Los animales fueron mantenidos en instalaciones del CMC habilitadas y certificadas por el ANMAT de acuerdo a la disposición 6344 y por el SENASA de acuerdo a la disposición 617/2002, bajo condiciones ambientales controladas: temperatura entre 22 +/- 3ºC, fotoperiodo controlado (12hs de luz/12hs de oscuridad) y libre acceso a alimento comercial y agua (POEs EN-002; GC-028; GC-030; GC-031; GC-042). Grupos: Se utilizaron 45 ratones hembra los que se dividieron en 3 grupos de 15 animales cada uno. Grupo CT. Grupo CAMPY. Grupo PRO-CAMPY. Administración de Antibióticos: Previamente, los grupos CT y PRO-CAMPY recibieron un tratamiento inicial con antibióticos en agua de bebida (ATB en agua de bebida) durante 5 días: enrofloxacina (60 mg/kg/d), florfenicol (120 mg/kg/d), trimetroprim sulfa (24 mg/kg/d y 120 mg/kg/d) y oxitetraciclina (15 mg/kg/día). El grupo CAMPY recibió el mismo tratamiento, pero durante 12 días. Administración de Probiótico: Vía de administración: vía oral por gavage. La administración del probiótico LP5 se realizó en el grupo PRO-CAMPY dos días después de retirados los antibióticos y posteriormente durante 7 días (desde el día 8 al 14) y dos veces por semana hasta finalizar el ensayo. Los grupos CT y CAMPY, recibieron Solución fisiológica. El día 15 los tres grupos (CT, CAMPY y PRO-CAMPY) fueron administrados con el C. coli (Admin CAMPY). Los muestreos de materia fecal se realizaron a tiempo 0 (día 1), pos-tratamientos con antibióticos (día 8 y 12), pos-administración de C. coli y entre cada necropsia (días 18, 24, 31 y 38). Sacrificio y toma de muestras: La eutanasia de los animales se realizó de acuerdo POE GC-045. Previo al momento de la eutanasia se recolectó toda la sangre por punción cardíaca para la realización de hemograma completo. Las necropsias de 3 ratones por grupo fueron realizadas a tiempo 0, previa administración de C. coli, (Necropsia 0, día 15), a la semana de (Necropsia 1, día 22), a las dos semanas (Necropsia 2, día 29), a las 3 semanas (Necropsia 3, día 36) y a las cuatro semanas (Necropsia 4, día 43). Se recogieron los siguientes órganos: hígado, bazo, intestino delgado (yeyuno e íleon) e intestino grueso (ciego) en esta secuencia utilizando instrumental estéril en cada tejido para minimizar la posibilidad de contaminación bacteriana entre muestras. La materia fecal y los órganos (ciego, íleon, yeyuno, bazo e hígado) obtenidos en las necropsias fueron analizados mediante cuantificación microbiológica (Laboratorio LAA) de las poblaciones: L. plantarum (en medio MRSrif para la medición del probiótico), lactobacilos (en medio MRS) Escherichia coli (en medio TBX), Enterobacterias (en medio VRBG), C. coli (en medio mCCDA para Campylobacter) y levaduras (en medio YGCm). Control Veterinario: Los animales fueron evaluados clínicamente a lo largo del estudio, teniendo en cuenta el aspecto general de estos y la consistencia de las heces.