Modelo piloto murino de colonización con diferentes cepas de Campylobacter coli

RUIZ, JULIA; WERNING, LAURA; ZBRUN, VIRGINIA; SEQUEIRA, GABRIEL; SALUZZO, MELISA; ZIMMERMANN, JORGE; FRIZZO, LAUREANO

Esperanza, Santa Fe

Jornada; IX JORNADA DE DIFUSIÓN DE LA INVESTIGACIÓN Y EXTENSIÓN; 2021

FCV-UNL

Las especies de Campylobacter termotolerantes (CT) han cobrado gran relevancia porque son los principales agentes zoonóticos que causan enfermedades entéricas transmitidas por los alimentos. Campylobacter coli, más prevalente en cerdos, junto con Campylobacter jejuni son las principales especies patógenas para humanos dentro de este género. Ambas especies son capaces de infectar y/o colonizar una amplia variedad de especies hospedadoras. La Unión Europea estima que entre el 50% y el 80% de las cepas de CT que infectan a los seres humanos provienen de la cadena avícola, mientras que entre el 15% y el 20% provienen de la cadena porcina1. Los modelos murinos de infección por CT presentan una alta variabilidad, falta de persistencia y ausencia de hallazgos clínicos o patológicos consistentes. Todo esto ha dificultado el desarrollo de modelos reproducibles que permitan el estudio de la relación huésped-Campylobacter2. Los ratones de laboratorio convencionales difícilmente pueden ser infectados por CT. Esto se debe a la resistencia a la colonización causada por la composición de la microbiota intestinal específica del ratón, que evita que los patógenos invadan al huésped murino. Un tratamiento con antibióticos de amplio espectro debilita la microbiota autóctona y permite la colonización del patógeno3. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un modelo murino piloto de colonización/infección con distintas cepas de C. coli. La prueba piloto fue aprobada por el Comité Asesor de Ética y Seguridad (CAES FCV-UNL), protocolo 518/19, noviembre de 2019. El ensayo fue realizado con 15 ratones de la cepa Balb/cCmedc, hembras, de 6 semanas de edad (CMC-ICiVet-Litoral, CONICET-UNL) dispuestos en 5 grupos de 3 animales. Los ratones fueron alimentados con agua y alimento ad libitum a lo largo de un experimento de 2 semanas, alojados a 22-24 °C, 55±15% de HRA y un ciclo de 12 h luz/12 h de oscuridad. Para facilitar la colonización de las cepas de C. coli, los animales recibieron un tratamiento antibiótico con enrofloxacina, florfenicol, trimetoprima sulfametoxazol y oxitetraciclina en agua de bebida durante 5 d. Dos días después, fueron administrados con 0,1 ml de NaHCO3 al 5% (p/v), 15 min antes de inoculado el patógeno. Cuatro grupos de ratones fueron administrados por única vez con 0,1 ml de diferentes cepas: C. coli DSPV458: 8,49 log10UFC; C. coli DSPV567: 8,09 log10UFC; C. coli DSPV570: 8,46 log10UFC; C. coli DSPV541: 8,86 log10UFC, suspendidas en caldo MH (Biokar, Francia) y el grupo control con 0,1 ml del mismo medio. La colonización/infección fue evaluada mediante un análisis microbiológico de muestras de heces tomadas a las 8, 24, 48, 72 y 96 h post-inoculación del patógeno y un examen diario de los signos clínicos. Las poblaciones de CT, bacterias ácido lácticas, Escherichia coli, enterobacterias y levaduras fueron cuantificadas mediante recuento en placa. Al final del ensayo, los animales fueron anestesiados y sacrificados mediante dislocación cervical. Las translocación bacteriana al medio interno y la colonización intestinal fueron evaluadas en bazo e hígado e íleon y ciego, respectivamente, con igual metodología que la realizada en las heces. Todos los ratones inicialmente carecían de CT. El tratamiento con antibióticos redujo las poblaciones bacterianas en general y en todos los grupos inoculados con el patógeno, la colonización se detectó a las 8 h y se mantuvo durante todo el ensayo en al menos un animal por grupo (Tabla 1). No se encontraron diferencias de colonización entre los grupos a lo largo del tiempo (P=0,56) ni entre los diferentes C. coli (P=0.28). Las cuatro cepas se detectaron en el ciego de al menos uno de los animales inoculados. Solo en un grupo se detectó C. coli DSPV458 en íleon. En bazo e hígado no hubo recuento de ninguna de las poblaciones (Tabla 2). La dosis oral administrada de cepas de C. coli con una microbiota intestinal desequilibrada fue suficiente para un establecimiento eficiente. Campylobacter coli colonizó a los ratones sin causar infección y se alojó en el tracto digestivo de los animales. La cepa C. coli DSPV458 colonizó el mayor número de ratones durante todo el experimento; por lo tanto, podría usarse para futuros modelos de colonización. Estos resultados motivan el desarrollo de un modelo murino de colonización predecible y reproducible para probar futuras herramientas de control alternativas a los antibióticos.