Determinación por HPLC de la composición de aminoácidos libres de la miel

COMETTO P.M.; RUBIO-MAS M.A.; DI PAOLA-NARANJO R.D.; FAYÉ P.; ALDAO M.A.J.

Montevideo

Simposio; IV Simposio y Exposición "Desafíos analíticos para el nuevo milenio" Sección América latina y El Caribw de la AOAC; 2001

AOAC International

Objetivo: desarrollar una técnica para la determinación cuali-cuantitativa de aminoácidos libres en muestras de miel a los fines de su caracterización fitogeográfica. Materiales y Métodos: se diluyeron 10 g de miel hasta un volumen final de 25 mL con buffer fosfato 0,14 M pH 2,12 agregados 2,375 mmoles de norleucina (estándar interno). La dilusión pasó a través de una columna de amberlite IR-120 donde los aminoácidos fueron retenidos, los mismos fueron eluidos con 25 mL de NH4OH 2M. Se llevó a sequedad 300 uL en un rotavapor y se derivatizó con 20 uL de una solución de fenilisotiocianato 0,84M en etanol-H2O-trietilamina (7:1:1). El material derivatizado se llevó a sequedad y se disolvió en el solvente de corrida: ácido acético/acetato de sodio 0,14M-trietilamina 0,01M mas 79mL/L de acetonitrilo, y se inyectó en un croamtógrafo Konik 500. Se empleó una columna de fase reversa C18 y gradietne dep oalridad entre el solvente de corrida y una mezcla acetonitrilo:H2O (6:4). Los feniltiocarbamil derivados fueron detectados con un detector UV a 254 nm. Resultados: en los cromatogramas se obtuvo una resolución admisible para 15 aminoácidos. Los valores promedio de CV (n=3) fueron de 6,02% para una mezcla de estándares y de 9,05% para una muestra de miel. Conclusión: la técnia descirpta permite obtener en la miel perfiles de aminoácidos reproducibles y por lo tanto comparables para muestras de origenes geográficos diferentes.