Modo de acción de sakacina G, en medio líquido, para la determinación de Listeria innocua como sustituto de Listeria monocytogenes

RIVAS, FRANCO P.; KOLARIK, GABRIELA; CAYRÉ, MARÍA E.; CAMPOS, CARMEN A.; CASTRO, MARCELA P.

San Rafael, Mendoza

Congreso; CLICAP 2018 Congreso Latinoamericano de Ingeniería y Ciencias Aplicadas; 2018

Facultad de Ciencias Aplicadas a la Industrian de la Universidad Nacional de Cuyo

Listeria innocua es la especie genéticamente más cercana a Listeria monocytogenes, ambas no fueron reconocidas como especies separadas hasta 1981. Sin embargo, sus características de supervivencia no son tan similares. El objetivo de este estudio fue comparar las sensibilidades de las cepas Listeria innocua ATCC 33090 y Listeria monocytogenes 01/155 frente a sakacina G, mediante un estudio de modo de acción, para validar esta cepa de L. innocua como un sustituto de L. monocytogenes para futuros estudios en alimentos. Para la determinación del modo de acción de sakacina G en medio líquido, el sobrenadante libre de células (SLC) neutralizado de la cepa productora Lactobacillus curvatus ACU-1, obtenido mediante centrifugación y esterilizado por filtración, fue añadido a cultivos en fase exponencial de los indicadores Listeria innocua ATCC 33090 y Listeria monocytogenes 01/155 (Laboratorio de Bacteriología Aplicada, INIQUI-CONICET). Los sistemas control consistieron en caldo BHI libre de bacteriocina inoculado con las bacterias indicadoras. El crecimiento de las mismas se monitoreó mediante lecturas de densidad óptica (DO) a 600 nm a intervalos de 1 h durante 12 h. El número de células sobrevivientes al tratamiento con bacteriocinas fue determinado mediante recuentos en placa a lo largo del ensayo, expresado como Log10 de unidades formadoras de colonias (ufc.ml-1) frente al tiempo. Cabe señalar que las diferencias de un orden de magnitud son generalmente consideradas como de importancia microbiana. La adición del SLC en la fase exponencial de crecimiento de las suspensiones celulares de L. innocua y L. monocytogenes dio como resultado una disminución en la densidad óptica, siguiendo un comportamiento similar en ambos casos; reduciéndose de 0.57 ± 0.14 (al momento de agregar el SLC) a 0.25 ± 0.13 (al final del ensayo); mientras que los sistemas controles presentaron un promedio final de DO de 1.45 + 0.05. Estos resultados están en consonancia con los recuentos bacterianos de ambos microorganismos indicadores, que mostraron una disminución en las células viables de 10.34 ± 0.34 Log10 ufc.ml-1 (en el momento de agregar el SLC) a 9.31 ± 0.01 Log10 ufc.ml- 1 (al final de la prueba), confirmando así el efecto inhibidor del SLC. En las muestras no tratadas (controles), no se observó inhibición del crecimiento de los microorganismos indicadores, presentando un recuento de 11.86 ± 0.04 Log10 ufc.ml-1 al final del ensayo, 2.54 Log10 ufc.ml-1 mayor que los sistemas tratados con bacteriocina. Además, como no se observaron diferencias estadísticas entre ellos, ni al comienzo de la prueba, ni en el momento de la adición de bacteriocina, o al final del experimento, se puede suponer que la sakacina G producida por Lb. curvatus ACU-1 ejerció el mismo patrón de inhibición contra L. innocua ATCC 33090 y L. monocytogenes 01/155. En vista de estos resultados, se plantea trabajar con L. innocua ATCC 33090 como bacteria sustituta en futuros ensayos, para un mayor margen de seguridad en la manipulación y evitar la exposición innecesaria al patógeno.