nfluencia de ondas de ultrasonido en la culturabilidad, viabilidad, arquitectura celular, actividad enzimática y potencial metabólico de Lacticaseibacillus paracasei 90.

BURGI; MARÍNEZ ; ALBARRACÍN V.; PÉREZ; SANTIAGO; ERICA HYNES; BERGAMINI CARINA

Zavalla

Jornada; VI Jornadas de Ciencia y Tecnología de la Facultad Ciencias Agrarias; 2021

UNR

En los últimos años, los tratamientos con ondas ultrasónicas han sido los preferidos para modificar la permeabilidad de las bacterias lácticas impactando positivamente en su actividad metabólica (Calasso et al., 2020). Estos tratamientos producen un fenómeno denominado cavitación que puede producir ? a través de varias acciones mecánicas y químicas - la ruptura de las cubiertas celulares liberando el contenido citoplasmático. Este método se usa comúnmente a escala de laboratorio, particularmente por ser un método eficiente, económico y de simple aplicación. Además, presenta la ventaja de ser un método seguro para su uso en la industria alimentaria en la cual ya se lo utiliza para distintos fines como dispersión, limpieza de equipos, emulsificación, desgasificación, etc., con la posibilidad de ser aplicado a escala industrial. Sin embargo, la eficiencia de los resultados dependerá de la cepa utilizada, la intensidad del tratamiento, la enzima de interés, entre otros factores. El objetivo de este trabajo fue evaluar los efectos de tres tratamientos de ultrasonido sobre la culturabilidad, viabilidad, actividad enzimática y potencial metabólico de Lacticaseibacillus paracasei 90 (L90). L90 fue inoculada al 2% v/v en un medio comercial para lactobacilos (MRS) e incubada a 37 ºC durante 20 h. Luego de la incubación, las células se cosecharon, se lavaron dos veces con buffer fosfato de potasio 50 mM, pH 7 y se resuspendieron en el mismo buffer para realizar los tratamientos. Las suspensiones fueron sometidas a tres tratamientos ultrasónicos diferentes: UB - un ciclo de sonicación utilizando un baño ultrasónico (40 kHz, 5 ºC, 1 h); US3- tres ciclos de sonicación (40 W, 50% de amplitud, 4ºC, 60 s y 60 s de enfriamiento en hielo después de cada ciclo) utilizando una sonda ultrasónica (US) de 20 kHz con una punta de 13 mm de diámetro; y US6- el mismo tratamiento descripto para US3 pero con seis ciclos de sonicación. La experiencia fue realizada por triplicado. Como control se utilizaron células sin tratar resuspendidas en buffer y mantenidas a 5 ºC. Inmediatamente después de los tratamientos, se realizaron recuentos microbiológicos y análisis de viabilidad por citometría de flujo tanto en suspensiones de células no tratadas (C) como tratadas (UB, US3 y US6). La actividad lactato deshidrogenasa (LDH) se midió en extractos libres de células obtenidos después de la centrifugación de las suspensiones de células tratadas y no tratadas (Peralta et al., 2019). Además, todas las suspensiones celulares fueron analizadas mediante microscopía electrónica de barrido (ME) (Peralta et al., 2019). Finalmente, para evaluar el efecto de los tratamientos sobre el potencial metabólico de L90, las células fueron inoculadas al 2% v/v en leche UAT (Ultra Alta Temperatura) e incubadas durante 20 h a 37 °C. Al finalizar la incubación se evaluó: crecimiento, pH, actividad proteolítica, lactosa, ácidos orgánicos y producción de diacetilo y acetoína (Peralta et al., 2019). Los resultados de todas las variables estudiadas se procesaron mediante análisis de varianza de una vía, con un nivel de significancia p0,05) en la culturabilidad de L90 por los tratamientos aplicados. Sin embargo, el análisis de ME reveló la presencia de algunas células dañadas y lisadas en las suspensiones tratadas con US. Mediante el análisis de citometría de flujo se pudo clasificar a las células en tres subpoblaciones: vivas, dañadas y muertas. Las suspensiones celulares tratadas con US6 presentaron los niveles más altos de células muertas y dañadas y los niveles más bajos decélulas viables (p