Estudio de genes Mat, microsatélites y ensayos de competencia en cepas de Aspergillus flavus no aflatoxicogénicas en Argentina.

ALANIZ ZANON M.S.; BARROS G.; COTTY, P.; CHULZE, S.

Río Cuarto, Córdoba

Congreso; VII Congreso Latinoamericano de Micotoxicología; 2013

El control biológico basado en el mecanismo de exclusión competitiva ha sido desarrollado como una de las estrategias más prometedoras para el control de aflatoxinas en diferentes cultivos, como maní (Arachis hypogaea L.) y maíz (Zea mays) entre otros. Esta tecnología consiste en la aplicación a campo de una o más cepas atoxicogénicas de Aspergillus flavus para excluir competitivamente cepas productoras de aflatoxinas y alterar la composición de las comunidades fúngicas asociadas a cultivos. El objetivo general de este trabajo fue seleccionar cepas de A. flavus no toxicogénicas pertenecientes a un grupo de 47 cepas previamente caracterizadas según parámetros morfológicos, fisiológicos, moleculares y genéticos, las cuales habían sido aisladas de distintas regiones agrícolas de la provincia de Córdoba como potenciales agentes de biocontrol. En segundo lugar, se planteó evaluar de manera preliminar su capacidad de competencia con una cepa altamente toxicogénica en un ensayo in vitro. Para caracterizar las cepas en estudio según el locus MAT, se llevó a cabo una amplificación por PCR de acuerdo a lo propuesto por Ramirez-Prado et al. (2008). Del total, 37 cepas (79%) mostraron un tipo de apareamiento MAT1-1, mientras que las restantes fueron MAT1-2.  Este resultado sugiere una baja probabilidad de ocurrencia de reproducción sexual entre individuos de esta población de cepas de A. flavus, y asegura que la cepa biocontroladora que se aplique a campo mantenga su característica de no aflatoxicogénica. La diversidad genética de las cepas se evaluó mediante un análisis de microsatélites o SSR (Simple Sequence Repeats) siguiendo la metodología de Grubisha y Cotty (2009). Las cepas evaluadas presentaron una distribución en grupos independientes de la región y fecha de aislamiento. Asimismo, a partir de ellos se eligió una cepa representativa de cada uno de 6 de los grupos con el fin de llevar a cabo el ensayo de competencia. Este análisis se realizó en granos de maíz y maní en caja de acuerdo a la metodología propuesta por Mehl y Cotty (2010). La determinación de la reducción en la producción de aflatoxinas se efectuó mediante TLC (TLC sílica gel 60 Merck kGaA. HX259108.1.05721.0001) y consiguiente cuantificación con CAMAG TLC Scanner 3. En general, se observó que las 6 cepas ensayadas tuvieron capacidad de desplazar competitivamente a la cepa toxicogénica co-inoculada, disminuyendo la producción de aflatoxinas. Las cepas que arrojaron los mejores resultados tanto para aflatoxina B1 como B2 en maní fueron AF100G y AFCHG2, con porcentajes de reducción de 97 y 100% para la primera, y 90 y 100% para AFCHG2, respectivamente. En el caso del maíz, la cepa AFCHG2, junto con GD070, fue nuevamente la que mayor reducción logró para AFB1 y AFB2 (94 y 78% para AFCHG2 y, 93 y 92% para GD070, respectivamente). Considerando estos estudios in vivo, sería importante realizar nuevos ensayos a campo, incluyendo la cepa AFCHG2 en un formulado mixto con otra/s cepa/s no aflatoxicogénica/s de A. flavus, que reúnan las características adecuadas aumentando así la posibilidad de competencia con cepas nativas toxicogénicas.