PURIFICACIÓN PARCIAL DE UNA BACTERIOCINA PRODUCIDA POR Enterococcus gallinarum CRL 1826, AUTÓCTONO DE CRIADERO DE RANA TORO

PASTERIS, S.E.; SECCO, F.; QUINTANA, G.S.; MINAHK, C.J.; ALE, C.E.; NADER-MACIAS, M.E.

San Miguel de Tucumán

Simposio; X SIMPOSIO NACIONAL DE BIOTECNOLOGÍA REDBIO ARGENTINA 2015; 2015

Las bacterias lácticas (BL) forman parte de diversos ecosistemas humanos y animales, y algunos géneros se emplean para la elaboración de alimentos fermentados. Actualmente se incluyen en productos y fórmulas probióticas, que constituyen una alternativa para disminuir el uso de antibióticos principalmente en los sistemas de cría intensivos. Algunas BL producen metabolitos antimicrobiano: ácidos orgánicos y bacteriocinas, que se utilizan como biopreservantes de alimentos. El objetivo de este trabajo fue avanzar en la purificación de la bacteriocina producida por Enterococcus gallinarum CRL 1826 (especie autóctona de criadero de Lithobates catesbeianus-rana toro), que inhibe a microorganismos asociados a epizootias en ranarios (Síndrome de la Pata Roja ? SPR) tales como Pseudomonas aeruginosa y Citrobacter freundii así como a Listeria monocytogenes, contaminante de carne de rana. Además, se evaluó el efecto antimicrobiano de diferentes fracciones parcialmente purificadas de la bacteriocina (tratadas y sin tratar con tripsina) que produce la BL frente a patógenos asociados SPR, patógenos humanos y contaminantes de alimentos (Gram positivos, Gram negativos y levaduras). El primer paso fue una precipitación con sulfato de amonio al 40% que permitió recuperar una elevada actividad bacteriocina. Posteriormente se determinó que se mantenía activa con el uso de una resina de intercambio catiónico (CM celulosa) a pH 5,5. La bacteriocina eluyó con concentraciones de NaCl 200 y 300 mM. Las fracciones fueron mezcladas, reprecipitadas con sulfato de amonio al 40% y resuspendidas con H20 bidestilada para posteriormente purificarla por Cromatografía Liquida de Alta Performance en Fase Reversa (RP-HPLC). Así se obtuvieron dos fracciones con actividad antagónica frente a L. monocytogenes. La evaluación del efecto de las diferentes fracciones parcialmente purificadas frente a los diferentes patógenos (autóctonos, de otros nichos ecológicos, humanos y contaminantes de alimentos) evidenció que inhibe solo a Staphylococcus aureus, E. faecalis y L. monocytogenes. Las fracciones tratadas con tripsina y posteriormente purificadas, no inhibieron a P. aeruginosa 1047 y C. freundii CFb (autóctonos de ranario). En base a los resultados obtenidos, se concluye que la bacteriocina que produce E. gallinarum CRL 1826 representaría una excelente opción para su aplicación como biopreservante de carcasas y ancas de rana, así como para su inclusión en la formulación de productos probióticos.