Análisis de la diversidad genética de poblaciones de P. nalgiovense en embutidos secos fermentados artesanales de Argentina usando marcadores SRAP-PCR

VILA G.; POSE G.; SEGURA J.

Congreso; CONGRESO LATINOAMERICANO DE INGENIERÍA Y CIENCIAS APLICADAS A LA INDUSTRIA- CLICAP 2015; 2015

  La fuente tradicional de hongos sobre embutidos secos fermentados de elaboración artesanal es la micoflora autóctona del lugar. Esta flora particular, además de su apariencia típica, contribuye al desarrollo de características organolépticas particulares que diferencian a cada embutido según su origen. Los hongos asociados al emplume de éstos embutidos son, de manera predominante, especies del género Penicillium, tales como P. nalgiovense. En estudios previos hemos realizado una caracterización morfo-fisiológica de los mohos asociados a la elaboración de salamines de las principales regiones productoras del país (Buenos Aires, Córdoba y La Pampa). El objetivo del presente trabajo fué utilizar marcadores moleculares SRAP-PCR en el análisis de la diversidad genética de poblaciones de P.nalgiovense presentes en la micoflora de embutidos secos fermentados artesanales de las principales zonas productoras de Argentina. Se analizaron 79 muestras de embutidos de las localidades de: Colonia Caroya, Oncativo, Tandil, Mercedes y La Pampa. Se obtuvieron 108 aislamientos de P. nalgiovense a partir de los cuales se seleccionaron un total de 22 aislamientos. Se realizaron cultivos en Agar Extracto de Malta (MEA) durante 7 días a 25 °C. De los micelios obtenidos se extrajo el ADN genómico con el kit DNAeasy Plant Mini (QIAGEN). El mismo fue cuantificado con un fluorómetro QUBIT 2.0. Un total de 16 combinaciones de primers (5 forward y 6 reverse) fueron testeados para evaluar su capacidad de brindar productos de amplificación por SRAP-PCR. Cada 20 ul de mezcla de reacción consistió en 15 ng de ADN genómico, 200uM dNTPs,  2,5 mM MgCl2, 0,25 ul de cada primer, buffer PCR 10X y  2,5U  de Taq polimerasa. El Termociclador fue programado con 5 ciclos a 94C por 5 min, 94C por 1 min, 35C por 1 min y 72 C por 1 min, luego 35 ciclos finales a 50C con una extensión final de 10 min a 72°C. Los fragmentos resultantes fueron visualizados en geles de agarosa al 1,5% conteniendo Gel Red. Con los resultados obtenidos se elaboró matriz de presencia (1) y ausencia (0). Se cuantificaron los datos por medio del Coeficiente de Similitud de Jaccard, y se agruparon por UPGMA (media aritmética no ponderada). Con el programa NTSyS. Cuatro combinaciones de primers mostraron amplificación consistente con un total de 10 bandas polimórficas. Si bien se puede determinar un perfil característico para cada región, existe una gran variabilidad genética. El fenograma resultante muestra que los aislamientos se agrupan por región geográfica, correspondiendo el Grupo I a las localidades de Colonia Caroya, Oncativo y Tandil y el Grupo II a las localidades de Mercedes y La Pampa. Este trabajo constituye la primer aplicación de éste tipo de marcadores para caracterizar poblaciones de P. nalgiovense.