“Escale Down de las condiciones para obtener cultivos de alta densidad en Escherichia coli Recombinante GI698 pTrx-GAD mediante estrategias sistemáticas de experimentación estadística”

POSE, CIEZA, MEDICI, GUEBEL

Universidad Nacional de Quilmes

Jornada; “PRIMERAS JORNADAS DE TESISTAS DE POSGRADO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE QUILMES”; 1999

A partir del análisis de factibilidad económico realizado se concluyo la necesidad de incrementar al menos 20 veces el nivel de biomasa máximo alcanzable como requisito para disponer satisfactoriamente del numero de dosis necesarias que requeriría la población argentina con riesgo de Diabetes tipo II (grupo etario 5 a 9 años). Con este objetivo se realizaron diversas experiencias de screening de variables aplicando diseños experimentales estadísticos multivariables. Se concluye que la cepa en estudio es no portadora de auxotrofías a aminoácidos, ni a bases púricas o pirimidínicas, ni tampoco a vitaminas. Pese a estas características, se observa que el microorganismo crece escasamente en medios sintéticos. Se demuestra que el crecimiento no se halla limitado o inhibido por los niveles de cationes presentes en el medio (Mg++, K+, Na+). Si en cambio, el crecimiento pudo ser mejorado incrementando la biodisponibilidad de oligoelementos (se ensayaron diferentes tipos de quelantes con diferentes composiciones de pool). Finalmente, se logró identificar condiciones de proceso conducentes  a aumentar el valor de biomasa máximo usual (aprox. 1,3 g/L) hasta los 10 g/L. El incremento alcanzado requiere de un fino manejo de los niveles de aireación aplicado, debido a la presencia de un significativo efecto cuadrático negativo, a la vez interactivo con la matriz de aminoácidos presentes. Ulteriores optimizaciones del nivel de biomasa alcanzado requerirán del análisis las potenciales interacciones individuales entre los 20 aminoácidos presentes en el medio para luego consecuentemente diseñar estrategias de alimentación (feed batch) en tal sentido. Debe demostrarse aun que los niveles de biomasa fijados como meta son compatibles con la persistencia del plásmido en estado productivo (sin rearreglos por recombinaciones).