COMPARACIÓN DE DOS MÉTODOS FENOTÍPICOS PARA LA DETECCIÓN DE PENICILINASA EN STAPHYLOCOCCUS AUREUS AISLADOS DE MASTITIS BOVINA

MAITO, J., RUSSI, N., TIRANTE, L., SIGNORINI, M. , POL, M., CALVINHO, L.

Vicente López, Buenos Aires

Jornada; Terceras Jornadas Internacionales de Calidad de Leche; 2009

Asociación Pro Calidad de la Leche y sus Derivados

La producción de β-lactamasa (BL) es considerada como el mecanismo más frecuente de resistencia a la penicilina por parte de Staphylococcus aureus aislados de infecciones intramamarias (IIM). Los laboratorios de diagnóstico usualmente utilizan los métodos de dilución en agar o de disco difusión en agar para determinar la susceptibilidad de S. aureus a la penicilina. Sin embargo, recientes estudios demostraron la producción de BL por parte de S. aureus aislados de IIM que tenían una concentración inhibitoria mínima (CIM) para la penicilina cercana o menor al punto de corte sugerido por CLSI; indicando que éste podría resultar muy alto para detectar resistencia a penicilina sobre todo en algunas cepas cercanas al límite de detección. Para evitar tales resultados inexactos, se requieren pruebas adicionales que identifiquen correctamente aislamientos productores de BL. La detección del gen blaZ mediante PCR es considerada la técnica de referencia por su buena correlación con la producción de BL en S. aureus aislados de IIM con valores de CIM mayores y menores al punto de corte sugerido por CLSI. Fueron evaluados 53 aislamientos de S. aureus obtenidos de muestras de leche (individuales o compuestas de cuartos) provenientes de casos clínicos y subclínicos pertenecientes a 32 rodeos ubicados en Buenos Aires, Sta. Fe, Córdoba y E. Ríos; incluyendo un máximo de 4 aislamientos por rodeo. Los mismos fueron identificados según la metodología estándar y luego almacenados en viales a -70ºC durante el período de un mes a 3 años. El método de dilución en agar fue desarrollado según las recomendaciones de CLSI, utilizando S. aureus ATCC 29213 como control. El punto de corte para considerar a los aislamientos resistentes fue >0,25 µg/mL. Se emplearon dos métodos para detección de penicilasa: a) método de clover leaf utilizando la cepa S. aureus Oxford ATCC 9144 como indicdor en agar Muller-Hinton; b) método de cefalosporina cromogénica en disco luego de la inducción de la producción de BL con un disco de oxacilina 1µg. S. aureus ATCC 29213 y 25923 fueron utilizados como controles positivo y negativo respectivamente, para la producción de BL. La concordancia entre los métodos fue analizada mediante la prueba de Cohen que evalúa la respuesta de 2 métodos en ausencia de un gold standard. El método de nitrocefina en disco identificó 21 aislamientos productores de BL entre los 23 que fueron detectados resistentes a penicilina mediante CIM y no se detectaron productores de BL dentro de los 30 aislamientos susceptibles. Los resultados a ambos métodos tuvieron un alto grado de concordancia (kappa=0.873; p<0.001). Los 2 aislamientos negativos para el método de nitrocefina tuvieron CIM >0.25 y >0.5 µg/mL. El método de clover leaf identificó todos los aislamientos considerados resistentes a penicilina como productores de BL (n=23) y no detectó como productor de BL a ninguno dentro del grupo considerado sensible, observándose concordancia completa entre ambos métodos (kappa=0.966; p<0.001). determinar la exactitud del punto de corte propuesto por CLSI para identificar aislamientos penicilino-resistentes está fuera del alcance de este estudio. Ningún aislamiento considerado susceptible según el método de dilución en agar fue encontrado como productor de BL; sin embargo previos hallazgos sugieren la conveniencia de desarrollar otros ensayos cuando los resultados del método de dilución en agar o disco difusión estén cercanos al punto de corte. El alto grado de concordancia y la facilidad de realización de los dos métodos evaluados, los hacen recomendables para laboratorios de diagnóstico de mastitis como complemento de las pruebas de sensibilidad a antibióticos. Sin embargo, utilizar métodos colorimétricos como nitrocefina, en los que pueden darse reacciones incompletas, puede resultar en la aparición de falsos negativos.