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El metilazinfos es el plaguicida más utilizado en el Alto Valle para el control de la carpocapsa (Cydia pomonella). El área se encuentra irrigada por canales donde habitan numerosas especies; entre ellas, los anfípodos (Hyalella curvispina) y los estadios tempranos de jejenes (Simulium spp). El objetivo del presente trabajo fue determinar la tolerancia a metilazinfos y los mecanismos involucrados en poblaciones que habitan áreas donde se realizan aplicaciones de plaguicidas con respecto a sitios no tratados. Para ello, en las seis poblaciones estudiadas, se determinó la toxicidad a metilazinfos y la actividad de esterasas y glutatión Stransferasas (GST) utilizando naftil acetato y CDNB como sustratos, respectivamente. Las tres poblaciones colectadas en áreas tratadas mostraron diferencias de toxicidad significativas. Además, la actividad de esterasas fue significativamente mayor en estas poblaciones. Los promedios de actividad fueron 2,17 ± 1,71 y 0,81 ± 0,35 en Simulium spp; 0,27 ± 0,10 y 0,14 ± 0,07 para H. curvispina y 0,13 ± 0,04 y 0,02 ± 0,006 para C. pomonella expresadas como µmol _naftol x min-1 x mg prot-1. La actividad de GST (µmol CDNB conj x min-1 x mg prot-1) fue significativamente mayor en las poblaciones expuestas de Simulium spp (0,23 ± 0,03) y C. pomonella (0,21 ± 0,03) respecto a las poblaciones control (0,20 ± 0,02 y 0,10 ± 0,03, respectivamente). Por otro lado, no se observaron diferencias significativas entre las poblaciones expuesta y control de H. curvispina (0,28 ± 0,06 y 0,30 ± 0,05, respectivamente). Los resultados mostraron que las esterasas cumplen un rol importante en la tolerancia a metilazinfos en las tres poblaciones expuestas estudiadas. Estas enzimas han sido asociadas con la tolerancia a metilazinfos en numerosas poblaciones de artrópodos. Asimismo, las esterasas pueden actuar como blancos primarios alternativos de los organosfosforados ya que la inhibición por estos compuestos reduce la concentración libre disponible de éstos para reaccionar con la enzima acetilcolinesterasa.