Caracterizacion molecular de Aspergillus sección Flavi por AFLPs

BARROS G.G.; CHULZE, S.N

Manual de Métodos Moleculares en Microbiología

Eudunne/Corpus

Lugar: Misiones; Año: 2011; p. 176 - 178

La técnica de AFLP (polimorfismo en la longitud de los fragmentos amplificados) es un método que combina elementos de RAPDs y RFLPs y se basa en la amplificación selectiva de los fragmentos de restricción generados a partir de ADN genómico. El ADN fúngico es digerido con endonucleasas de restricción, generalmente una enzima de corte raro y otra de corte frecuente, tales como EcoRI y MseI, respectivamente. Los adaptadores de oligonucleótidos son ligados a los extremos del ADN genómico en los sitios de restricción específicos. La amplificación de dichos fragmentos se lleva a cabo usando cebadores que incluyan las secuencias de los adaptadores, parte de la secuencia del sitio de restricción y nucleótidos adicionales elegidos al azar. Uno de los cebadores se marca radiactivamente con [g33P] ATP, por lo tanto, serán visualizados sólo los fragmentos amplificados que llevan dicha marca. Posteriormente, son separados por electroforesis en geles de poliacrilamida desnaturalizantes y detectados por autoradiografía (1). Los marcadores generados por AFLPs son neutros, no sujetos a selección natural y son generados desde un número grande de locus independientes a partir de distintas partes del genoma (2). La reproducibilidad de los marcadores generados por AFLPs, su alta resolución y eficacia y la posibilidad de analizar el genoma completo brinda una excelente herramienta para estudios de taxonomía molecular y evaluar la diversidad de las poblaciones fúngicas a nivel de especie, cepas y biotipos (1). Debido a su importancia económica, el género Aspergillus es el mejor descripto desde el punto de vista taxonómico dentro de los hongos filamentosos. Dentro del subgénero Circumdati se ubica la sección Flavi donde históricamente están incluidas las dos especies de mayor impacto económico: A. flavus y A. parasiticus. Estas especies se caracterizan por producir aflatoxinas, micotoxinas carcinogénicas, contaminando diversos cultivos (3).