POTENCIAL USO DE EXTRACTOS DE Zuccagnia punctata Cav. Y SUS COMPUESTOS AISLADOS EN PROCESOS INFECCIOSOS E INFLAMATORIOS

NUÑO G.; ALBERTO M. R.; ARENA, M.E.; ZAMPINI I.C; ISLA M.I

San Miguel de Tucumán

Simposio; X Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO Argentina; 2015

Red Bio

Debido a la dificultad para erradicar las infecciones causadas por S. aureus (sepsis, pneumonia, infección de piel y tejidos blandos, bacteriemia y endocarditis) por su alta capacidad para desarrollar resistencia a antibióticos y por su capacidad para desarrollar estructuras especializadas como biofilm, es necesario encontrar tratamientos alternativos con nuevos agentes antimicrobianos. La fitomedicina es una alternativa terapéutica muy interesante puesto que los extractos vegetales contienen múltiples componentes, los cuales podrían actuar sobre múltiples blancos por diferentes mecanismos de acción. Zuccagnia punctata Cav. (Fabaceae), especie vegetal seleccionada para este estudio, es una planta medicinal endémica de la Argentina usada en el tratamiento de infecciones fúngicas y bacterianas, asma, artritis y reumatismo, y otras patologías asociadas con procesos inflamatorios.El objetivo del presente estudio es evaluar el efecto de un extracto de Zuccagnia punctata y de sus metabolitos bioactivos mayoritarios sobre el crecimiento y desarrollo de biofilm producido por S. aureus, así como la inhibición de enzimas proinflamatorias, y el análisis de la seguridad de su uso mediante estudios de toxicidad. A partir de las partes aéreas de Z. punctata se preparó por maceración un extracto. Con el fin de identificar los compuestos con actividad antimicrobiana se realizó un aislamiento bioguiado a través de cromatografía en columnas (Sílica gel 60, Sephadex LH20, Columna C18) y HPLC-ESI-MS/MS determinando la presencia de cuatro compuestos mayoritarios. La actividad antimicrobiana, concentración inhibitoria mínima (CIM) y concentración bactericida mínima (CBM), tanto del extracto como de los compuestos identificados se determinó por ensayos de microdilución seriada en medio líquido, usándose siete aislamientos clínicos de S. aureus con diferente perfil de resistencia obtenido de infecciones de pacientes del Hospital Nicolás Avellaneda, Tucumán. La inhibición de la formación de biofilm e inhibición del metabolismo del biofilm preformado se determinó a través de ensayos espectrofotométricos por revelado con Cristal violeta y XTT (2, 3- bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-5-[(fenilamino)-carbonil]- 2H-tetrazolium hidróxido). Se estudió el daño celular de S. aureus a través de microscopía electrónica de barrido y de transmisión. La actividad antiinflamatoria se determinó estudiando la inhibición del extracto y los compuestos identificados sobre tres enzimas proinflamatorias ciclooxigenasa-2 (COX-2), lipoxigenasa (LOX) y fosfolipasa (sPLA2) a través de ensayos espectrofotométricos. La toxicidad tanto del extracto como de los compuestos identificados se determinó usando el test de toxicidad aguda, observando la viabilidad de las larvas de Artemia salina, y el test de Ames observando el número de revertantes por placa de cepas de Salmonella typhimurium TA98 y TA100. Los resultados indican que tanto el extracto como los compuestos aislados poseen actividad antimicrobiana contra S. aureus produciendo daño a nivel de la superficie celular como del citoplasma, contribuyendo además, a evitar el desarrollo de biofilm o a la erradicación del biofilm ya formado al disminuir su metabolismo. También es capaz de inhibir la actividad de las enzimas proinflamatorias (COX-2, LOX y sPLA2). Ninguna de las muestras resultó tóxica a las dosis en la que presentan actividad biológica. Estos resultados indican que podrían desarrollarse productos de interés biotecnológicos utilizando extracto de Z. punctata como principio activo para ser destinados al tratamiento de infecciones bacterianas provocadas por S. aureus resistentes a los antibióticos convencionales, además de contribuir a reducir el estado inflamatorio generado en una infección