Prueba de fragilidad osmótica eritrocitaria: explorando el uso alternativo de otras soluciones salinas

BORDÓN, GABRIEL; SERRANO, CLAUDIA P; CRISTALDO, DANIEL; IVÁN MA. VICTORIA; GAUNA PEREIRA, MA. DEL CARMEN; OJEDA, GONZALO A

CORRIENTES

Congreso; SEGUNDO CONGRESO BIOQUÍMICO DEL NEA; 2014

La membrana eritrocitaria es semipermeable, y la capacidad para resistir el efecto hipotónico del medio se denomina fragilidad osmótica eritrocitaria (FOE) y está definida por el cociente volumen/área de superficie. La capacidad del eritrocito (RC) para soportar la hipotonicidad se debe a su forma bicóncava, que permite que la célula incremente su volumen en cerca de un 70% antes de que la superficie de su membrana se distienda; una vez que se alcanza este límite se produce lisis. La Prueba de Fragilidad Osmótica (PFOE) consiste en mezclar sangre del paciente con soluciones decrecientes de NaCl tamponada y medir la hemolisis que se produce. Una PFOE aumentada se encuentra en la esferocitosis hereditaria y en las anemias hemolíticas autoinmunes, en la enfermedad hemolítica del recién nacido y en las anemias sintomáticas adquiridas en las cuales existe tendencia a la esferocitosis. La disminución de la PFOE se observa en la anemia ferropénica, talasemia y en las hemoglobinopatías S y C, por lo que se aprecia el valor diagnóstico de esta sencilla prueba. El Objetivo de este trabajo fue comparar el comportamiento de la PFOE utilizando diferentes soluciones salinas en relación a la metodología estándar. Para la determinación de la PFOE se usó sangre entera venosa heparinizada de voluntarios clínicamente sanos y se llevó a cabo la prueba, según técnica Parpart y col 1946 Se utilizaron soluciones de NaCl y NaCl/ Na2HPO4/ NaH2PO4 en rango de 9 ? 1 g/L pH= 7,40; KCl, y LiCl, en concentraciones en el rango de 9 a 1 g/L y pH=9. Se calculó el % de lisis por lectura 540 nm. Se asignó un valor de 100% de lisis a la lectura con el sobrenadante del tubo 12 (agua) y expresaron las lecturas de los otros tubos como % respecto a éste. De los resultados hallados se puede concluir que la utilización de soluciones de NaCl y NaCl tamponadas no mostró diferencias significativas, hallándose un 50% de hemólisis a 4,5 g/l. Las variaciones observadas en las curvas utilizando KCl pueden deberse al mayor contenido intracelular que podría provocar una mayor FOE, ya que a 5,5 g/l absorben cantidades considerables de H2O y alcanzar el volumen crítico para lograr un 50% de lisis. Con respecto al LiCl, existe en la membrana del eritrocito un contratransportador Na-Li que permite el ingreso de Li a bajas concentraciones y la salida de Na en proporción 1:1. El egreso de Na estaría acompañado con agua, lo que explica porque a bajas concentraciones de LiCl se obtiene menor FOE. Utilizando soluciones de NaCl y NaCl tamponada no se hallaron diferencias entre ambas. A su vez los valores obtenidos se correlacionan con los valores de referencia de pacientes normales. Esto sugiere que se podría utilizar una solución de NaCl para realizar la PFOE como alternativa a la solución tamponada de NaCl.