Desarrollo y validación de una técnica para la detección de Listeria monocytogenes en carne bovina

LINARES L.; REYES C.,; BRUSA V; ORTEGA E; GALLI L; LEOTTA G.A

Congreso; III Congreso Bioquímico del Litoral. XVI Jornadas Argentinas de Microbiología; 2015

Las Enfermedades Transmitidas por Alimentos (ETA), constituyen un problema en la salud pública. Listeria monocytogenes es el agente causal de listeriosis y fue aislado de alimentos de origen cárnico. La carne bovina molida es uno de los subproductos cárnicos de mayor consumo en Argentina. La principal vía de transmisión de L. monocytogenes en una carnicería es la contaminación cruzada, particularmente en comercios que ofrecen quesos y fiambres. Los objetivos del estudio fueron: i) desarrollar y validar una técnica de PCR en tiempo real para la detección L. monocytogenes a partir del caldo de pre-enriquecimiento, ii) determinar la frecuencia de L. monocytogenes en carne bovina molida a nivel de boca de expendio utilizando la técnica de PCR en tiempo real desarrollada y validada como tamizaje. Se diseñó un par de primers y una sonda de hidrólisis. Se estandarizó y validó la técnica de RT-PCR en una etapa intra-laboratorio a partir de caldo de pre-enriquecimiento. Se utilizaron 180 muestras contaminadas experimentalmente con 50 cepas de L. monocytogenes (10, 100 y 1000 UFC mL-1) y 30 cepas no L. monocytogenes. Se determinaron los siguientes parámetros: a) rango de trabajo (límite de detección y límite de corte), b) selectividad (inclusividad y exclusividad), y c) robustez. Entre los meses de octubre de 2010 y abril de 2011, se tomaron 110 muestras de carne bovina molida cruda, las cuales se analizaron con la técnica de RT-PCR y la Norma ISO 11290-1:1996/A1:2004. En la etapa de validación intralaboratorio la técnica tuvo como límite de detección 10 UFC mL-1; límite de corte 100 UFC mL-1; 95,3% de inclusividad, 100% de exclusividad y 96,2% precisión analítica. Se obtuvieron los mismos resultados al introducir variables en forma deliberada. Al analizar 110 muestras de carne bovina molida obtenidas en comercios minoristas, 57 (51,8%) fueron detectadas como positivas por la técnica de RT-PCR. El nivel de concordancia del análisis de estas muestras por RT-PCR y metodología tradicional fue kappa= 1. En el presente trabajo, se desarrolló, estandarizó y validó una técnica para la detección de L. monocytogenes en carne bovina molida, minimizando la cantidad de tiempo utilizado en el método convencional a 24 horas, por lo cual representa una gran ventaja para una rápida identificación de muestras negativas a este microorganismo en productos y subproductos cárnicos.