Evaluación de tres técnicas de PCR para detectar Salmonella spp. a partir de carne picada.

ALIVERTI V.; LIRON P.; BRUSA V.; ALIVERTI F.; BROCARDO S.; LEOTTA G.A.

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; I CONGRESO INTERNACIONAL DE ZOONOSIS Y ENFERMEDADES EMERGENTES Y VII CONGRESO ARGENTINO DE ZOONOSIS.; 2011

Asociación Argentina de Zoonosis

La salmonelosis es una de las enfermedades zoonóticas más frecuente en el mundo. Los animales son el principal reservorio de Salmonella spp. y el consumo de alimentos contaminados es una de las vías de transmisión al hombre. En el Código Alimentario Argentino (CAA) se establece como parámetro microbiológico obligatorio para carne picada fresca la ausencia de Salmonella spp. y para su análisis se recomienda el Capítulo 5 Salmonella-BAM. Para realizar esta metodología se requiere demasiado tiempo por lo cual es necesario contar con una técnica de tamizaje a partir del caldo de pre-enriquecimiento. El objetivo de este trabajo fue evaluar tres técnicas de PCR para el tamizaje de Salmonella spp. a partir de carne picada. Se diseñó una técnica de PCR en tiempo real para la detección de Salmonella spp. utilizando SYBR Green. Se determinó la inclusividad y exclusividad de la técnica con 25 cepas de Salmonella y 30 cepas no-Salmonella. La técnica de PCR-TR diseñada, una PCR convencional y una técnica de PCR-TR comercial (Foodproof® Salmonella Detection Kit - 5´ nuclease, Merck) fueron evaluadas con 58 muestras de carne picada obtenidas a nivel de boca de expendio minorista. Las muestras fueron procesadas según la metodología recomendada en el CAA. A partir del caldo de pre-enriquecimiento se realizó la extracción de ADN mediante ebullición en buffer tritón y el mismo extracto fue utilizado para realizar las tres PCR. Los resultados obtenidos con las técnicas de PCR fueron contrastados con los resultados obtenidos en el aislamiento. Con la técnica de PCR invA se obtuvo 81,8% (IC 59,0-100) de inclusividad, 93,6% (IC 86,6-100) de exclusividad, 75,0% (50,5-99,5) de valor predictivo positivo y 95,6% (IC 89,7-100) de valor predictivo negativo. Con la técnica de PCR-TR diseñada se obtuvo 72,7% (IC 46,4-99,0) de inclusividad, 95,7% (IC 89,9-100) de exclusividad, 80,0% (55,2-100) de valor predictivo positivo y 93,7% (IC 86,9-100) de valor predictivo negativo. Con la técnica de PCR-TR comercial se obtuvo un 100% de inclusividad, exclusividad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo. Los resultados obtenidos con la PCR comercial coincidieron con el aislamiento, sin embargo las PCR artesanales no cumplieron con el desempeño esperado. Los resultados falsos positivos pueden deberse a la amplificación de secuencias inespecíficas y entre las causas de resultados falsos negativos se encuentra el diseño de los oligonucleótidos utilizados. Estos inconvenientes pueden resolverse rediseñando los oligonucleótidos en base a las secuencias de los aislamientos circulantes en Argentina, como así también mediante el diseño y utilización de sondas de hidrólisis y controles internos de amplificación.