Caracterización preliminar de bacteriocinas producidas por lactobacilos aislados de residuos de cervecería.

SARDOY, MARÍA EUGENIA; ASURMENDI, PAULA; GARCÍA, MARÍA JOSÉ; PASCUAL, LILIANA; BARBERIS, LUCILA

Rosario

Congreso; XIII Congreso Latinoamericano de Microbiología, XIII Congreso Argentina de Microbiología.; 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Los lactobacilos son capaces de producir sustancias antimicrobianas como ácidos orgánicos, peróxido de hidrógeno, bacteriocinas, entre otros. Las bacteriocinas son compuestos antagónicos de naturaleza proteica con actividad inhibitoria sobre especies relacionadas o no a la productora. El objetivo de este trabajo fue caracterizar las sustancias con actividad antimicrobiana producidas por Lactobacillus brevis B52, L. plantarum B54 y L. plantarum B57. El efecto antibacteriano producido por los sobrenadantes libres de células (SLC) puros y neutralizados (SLCN) de cada cepa de  Lactobacillus  spp.  fue  evaluado  utilizando  el método  de  difusión  en  pozos  sobre  Escherichia  coli.  Los  sobrenadantes  fueron  sometidos  a 100ºC por  60 min y a  121ºC durante  10 min; ajustados a  diferentes  pH  (2‐11); y  tratados  con  tripsina  (1 mg/ml) y urea  (1%  p/v).  Luego,  su actividad biológica fue determinada por el método de difusión en pozos. Para evaluar el modo de acción de los metabolitos contenidos en los SLCN, los mismos fueron adicionados a un cultivo de E. coli y se incubó a 37ºC durante 20 h. A diferentes intervalos se realizaron mediciones de DO a 600 nm. A partir de las curvas de crecimiento se calculó el periodo de latencia (λ), velocidad de crecimiento máxima (μ máx.) y tiempo de generación (G). Los halos de inhibición del crecimiento bacteriano producido por los SLC de todas las cepas de BAL, estuvieron comprendidos entre 21,25 y 23,25 mm. Cuando los SLC  fueron neutralizados, se mantuvo más del 66% de la actividad antimicrobiana, demostrando que la mayor parte de la inhibición es causada por la acción de sustancias bioactivas diferentes a ácidos orgánicos. El tratamiento con tripsina eliminó la  actividad  antimicrobiana  del  SLCN,  demostrando  la  naturaleza  proteica  de  los  metabolitos  secundarios,  lo  que  sugiere  la  presencia  de bacteriocinas.  La  actividad  inhibitoria  de  las  bacteriocinas  no  fue  alterada  significativamente  al  ser  tratadas  con  calor  o  con  urea.  Todas  lasbacteriocinas fueron activas a un amplio rango de pH comprendido entre 2 a 9, 2 a 11 y 4 a 7 para B57, B52 y B54, respectivamente; con un pH óptimo entre  5 y  7. Estas  bacteriocinas  fueron  resistentes al  tratamiento  con  urea, estables al  calor y activas en  un amplio  rango de pH. Al evaluar el modo de acción de las bacteriocinas presentes en el SLCN, se observó un efecto bacteriostático sobre E. coli, que afectó todos los parámetros  de  crecimiento  evaluados,  aumentando  el  valor  de  λ,  disminuyendo  la  µ  máx  e  incrementando  el  valor  de  G  de  E.  coli.  En conclusión,  los  hallazgos  de  este  estudio  demostraron  que  los  lactobacilos,  además  de  ácidos  orgánicos,  producen  sustancias  de  naturaleza proteica  denominadas  bacteriocinas,  las  cuales  son  responsables  de  la  mayor  actividad  antimicrobiana  producida  por  estas  cepas  de lactobacilos.