ANÁLISIS FÍSICOQUÍMICO DE XILANASAS FÚNGICAS EN PRESENCIA DE POLIETILENGLICOL MEDIANTE MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS

LOUREIRO, DANA B.; ZOFF, LUCIANA; ROMANINI, DIANA; TUBIO, GISELA

Rosario

Congreso; XVIII Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2013

Docentes FCByF UNR

Introducción: Las xilanasas (Xyl) son enzimas que catalizan la hidrólisis de los enlaces glicosídicos β-1,4 del xilano, polisacárido mayoritario en la pared celular de las plantas. Dichas enzimas son producidas por una gran cantidad de organismos. Algunos hongos filamentosos productores de esta enzima poseen la capacidad de excretar las mismas al medio lo que le facilita la ulterior obtención de Xyl. Un estudio estructural y funcional de Xyl de diversas fuentes es de fundamental importancia debido a que, de acuerdo a su procedencia, presentan diferentes características y conductas químicas en presencia de polímeros de cadena flexible. Las técnicas espectroscópicas: Absorbancia, Fluorescencia y Dicroísmo Circular (DC), proporcionan información útil y relevante con respecto a la estructura de las Xyl bajo estudio y de sus cambios conformacionales debidos a la presencia de polietilenglicol (PEG) en el medio. Objetivos: El objetivo de este trabajo fue realizar un estudio comparativo de la estructura de Xyl de diversas fuentes fúngicas: Thermomyces lanuginosus, Trichoderma viride y Aspergillus níger, en ausencia y presencia de PEG para la posterior validación de técnicas de purificación que utilizan polímeros de cadena flexible, como son los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) y la precipitación con polímeros de afinidad. Resultados: Se realizaron espectros de emisión de fluorescencia de cada Xyl en buffer citrato 50mM a pH 5,30 en ausencia y presencia de PEGs de pesos moleculares promedios 1000 y 8000 al 5%, y a diferentes temperaturas: 21, 40, 50, 60 y 70°C. La posición del λmax oscila entre 334 y 345nm, no observándose un corrimiento apreciable hacia el azul ni el rojo en ausencia o presencia de PEG a las distintas temperaturas ensayadas. Se determinó la hidrofobicidad superficial (So) de Xyl de T. lanuginosus y A. níger empleando la sonda óptica fluorescente ácido 8-anilino 1-naftalen-sulfónico (ANS) en ausencia y presencia de PEG a 25, 50 y 65ºC. Los resultados muestran en ambos casos que So disminuye en presencia de PEG. A diferencia de T. lanuginosus, valores de So para A. níger mostraron un incremento frente al aumento de la temperatura. Por otro lado, los espectros de DC de Xyl de A. níger y T. viride en ausencia y presencia de PEG de diferentes PM, indicaron que la presencia del PEG no altera apreciablemente la estructura secundaria de la Xyl en las condiciones ensayadas. Conclusiones: Los resultados obtenidos representan un aporte significativo para el diseño de una metodología de purificación de la Xyl a partir del sobrenadante de un cultivo de los cultivos fúngicos de Thermomyces lanuginosus, Trichoderma viride y Aspergillus níger. So x 10-3 (μM-1)