Efecto de solventes orgánicos y estrés salino sobre el crecimiento, morfología y producción de esterasas de B. licheniformis S-86.

TORRES SEBASTIÁN; PERA LICIA; CASTRO GUILLERMO R.

San Miguel de Tucumán, Tucumán, Argentina.

Simposio; Simposio Internacional de Biotecnología. II Simposio Argentino-Italiano de Bacterias Lácticas.; 2004

CERELA-PROIMI-CONICET-Embajada Italiana

B. licheniformis S-86 es un microorganismo resistente a solventes orgánicos que produce dos esterasas estables en solventes no acuosos. Diversos estudios han demostrado que estímulos de estrés (solventes orgánicos tóxicos, elevadas concentraciones de sales) inducen en bacterias y levaduras una serie de alteraciones fisiológicas como ser retraso en el crecimiento y cambios morfológicos. En este trabajo estudiamos el efecto que tienen solventes orgánicos y estrés salino sobre el crecimiento, la morfología y la producción de esterasas de B. licheniformis S-86. B. licheniformis S-86 es un microorganismo resistente a solventes orgánicos que produce dos esterasas estables en solventes no acuosos. Diversos estudios han demostrado que estímulos de estrés (solventes orgánicos tóxicos, elevadas concentraciones de sales) inducen en bacterias y levaduras una serie de alteraciones fisiológicas como ser retraso en el crecimiento y cambios morfológicos. En este trabajo estudiamos el efecto que tienen solventes orgánicos y estrés salino sobre el crecimiento, la morfología y la producción de esterasas de B. licheniformis S-86. Los ensayos se realizaron mediante cultivo en lote a 50 ºC con agitación, empleando un medio de cultivo sintético suplementado o no con alcohol isoamílico (ISO) (0,4 % y 0,6 %) o NaCl (1,5 M). El crecimiento fue evaluado determinando velocidad específica de crecimiento. Los estudios morfológicos se realizaron mediante microscopía electrónica de barrido y transmisión. Se realizó un ensayo de inducción de la producción de esterasas con ISO 0,4 %, adicionado durante la fase exponencial de crecimiento y midiendo actividad esterasa intracelular y extracelular 1 hora después de la inducción. B. licheniformis S-86 presentó, con respecto al control (μ = 3,12 h-1), un retraso significativo en el crecimiento, tanto en presencia de ISO 0,6 % (μ = 0,54 h-1) como de NaCl 1,5 M (μ = 0,35 h-1). En estos dos últimos medios se observó elongación celular y crecimiento filamentoso, comportamiento no observado en el control. Las células normales presentaron una longitud y diámetro promedio de 1,3 μm y 0,4 μm, respectivamente; mientras que en presencia de ISO 0,6 % y NaCl 1,5 M las células tuvieron una longitud 5,4 y 2,1 veces mayor, respectivamente. En ambos medios (ISO 0,6 % y NaCl 1,5M) las células presentaron una superficie lisa, a diferencia de las células control que presentaron una superficie rugosa, posiblemente asociada a la producción de mucopolisacárido. La presencia de septos y división celular fue frecuente en las células control; también se observó formación de septos en presencia de NaCl, sin embargo en presencia de ISO 0,6 % la formación de septos fue poco frecuente, y se observó división de la membrana plasmática no acompañada por el tabicamiento de la pared celular. La producción de ambas esterasas fue aumentada en presencia de ISO, pero el NaCl tuvo un efecto inhibidor sobre la producción de las mismas. El ISO tuvo un efecto inductor sobre la producción de esterasas, incrementando 1,9 veces la actividad esterasa específica total intracelular, con respecto a la observada en el control. Tanto el ISO como el estrés salino inducen en B. licheniformis S-86 alteraciones morfológicas, las cuales podrían estar asociadas a un mecanismo general de resistencia. Sin embargo, en respuesta al ISO posiblemente intervengan otros mecanismos de resistencia, relacionados con la inducción de las esterasas.