Oxido nítrico en hígado sobrecargado con hierro: limitaciones de la detección por E.P.R

AIMO L; GALLEANO M; BORRONI M.V; SVARTZ A; GUERSCHBERG L; PUNTARULO S.

Viña del Mar

Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular; 2000

Soc. de Bioquímica y Biología Molecular de Chile

Oxido nítrico en hígado sobrecargado con hierro: limitaciones de la detección por E.P.R Aimo L., Galleano M., Borroni M.V., Svartz A., Guerschberg L. y Puntarulo S. Fisicoquimica-PRALIB (CONICET),Facultad de Farmacia y Bioquímica, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. Se estudiaron los niveles de oxido nítrico (NO) en hígado de rata sometidas a sobrecarga de hierro (200 mg/Kg) con y sin administración simultanea de LPS (lipopolisacárido de E. coli). NO fue detectado por E.P.R. utilizando dietilditiocarbamato como atrapador. El tratamiento con LPS durante 5 h incremento los niveles de NO detectado con respecto a los valores controles (5.1±0.6 U.A. y 0.5±0.2 U.A. respectivamente) y la administración previa de L-NAME previno dicha respuesta (0.8±0.4 U.A.). En los animales tratados con lps y simultáneamente con hierro dextrán (Fe) se observo un significativo incremento (122%) en los niveles de NO detectados en hígado con respecto al grupo tratado solo con LPS que no fue reflejado por los niveles de NO2- y NO3- en plasma. La actividad de la NOsintasa en homogeneizado de hígados controles y tratados con Fe (sin LPS) no mostró diferencias significativas (285± 40 y 283± 17 pmol/min/mg tejido, respectivamente), sugiriendo que la suplementación con Fe no modifico la actividad de la enzima. La incubación de hígados provenientes de animales controles y sobrecargados con Fe con una fuente generadora constante de NO (1mM SNAP) genero una velocidad de producción del complejo DETC2-Fe-NO significativamente distinta. Estos resultados sugieren que los niveles de Fe endógeno afectan la cinética de detección de NO por EPR utilizando DETC como atrapador. Esta interferencia limita la utilidad de la metodología a situaciones en las cuales los niveles de hierro de las muestras permanecen constantes. Financiado por TWAS, ANPCyT y Universidad de Bs. As.