Implicancias de los diacilgliceroles sobre el receptor de acetilcolina nicotínico muscular

KAMERBEEK CB; VALLÉS AS; BORRONI M.V; PEDICONI MF; BARRANTES F.J

Buenos Aires

Jornada; V Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lipidos y Lipoproteínas; 2012

INIBIBB-INIBIOLP

Implicancias de los diacilgliceroles sobre el receptor de acetilcolina nicotínico muscular Kamerbeek CB1; Vallés AS1; Borroni, MV1,2; Pediconi MF1; Barrantes FJ2 1INIBIBB (CONICET-Univ. Nac. Sur), Bahía Blanca; 2Laborat. Neurobiol. Molec. (UCA / CONICET), 1107 Buenos Aires. Objetivo: Evaluar la participación de los diacilgliceroles (DAGs) en la modulación de la expresión y distribución del receptor de acetilcolina nicotínico de tipo muscular (AChR) hacia y desde la membrana plasmática. Metodologías: Cultivo de células CHO-K1/A5, línea celular producida en nuestro laboratorio. Transfección transiente de las mismas para expresar proteínas fluorescentes. Ensayos de unión del radioligando [I125]-bungarotoxina y microscopía de fluorescencia para evaluar el efecto de los tratamientos con diferentes drogas. Resultados: DAGs exógenos, de cadena larga o corta, afectaron la distribución y cantidad total del AChR en forma dependiente del tiempo de incubación. La generación de DAG endógeno mediante la inhibición de las diacilglicerol kinasas de tipo I produjo un efecto sinérgico con DAG exógeno. El forboldibutirato, un análogo no metabolizable de los DAGs, reprodujo los efectos observados con DAGs de cadena corta. La especificidad del fenómeno fue comprobada en experimentos controles con un análogo inactivo de forboldibutirato, que no produjo cambios sobre el AChR. Con el fin de evaluar la posible participación de las proteínas kinasas C (PKC) sobre los efectos mediados por DAGs, se recurrió a un inhibidor específico de la PKCδ, la rottlerina, a un ionóforo de calcio, el A23187, y a un inhibidor no competitivo de las calcio-ATPasas de retículo endoplásmico, la thapsigargina. Conclusión: Tanto los DAGs endógenos como exógenos modulan la expresión y distribución del AChR. Estos efectos podrían estar mediados por la acción ejercida por DAGs sobre las PKC novel a tiempos largos de incubación.