Influencia de vectores y fómites en la transmisión de Campylobacter termotolerante en crianzas sucesivas de pollos parrilleros en granjas avícolas

ROSSLER, E.; ROMERO SCHARPEN, A.; BERISVIL, A.P.; SIRINI, N.E.; FRIZZO, L.S.

Esperanza

Jornada; VI Jornada de Difusión de la Investigación y Extensión (2018); 2018

Facultad de Ciencias Veterinarias - Universidad Nacional del Litoral

Campylobacter termotolerante, principalmente Campylobacter jejuniy Campylobacter coli, son reconocidos patógenos humanos principalesagentes causales de gastroenteritis de origen bacteriana transmitida por losalimentos2. Estas bacterias se encuentran principalmente en el tractogastrointestinal de aves de corral y estas últimas son las principales fuentesde infección para el humano. El consumo de carne aviar poco cocida o lacontaminación cruzada con otros alimentos constituye las principales vías detransmisión de Campylobacter termotolerante al humano1. Campylobacter coloniza el tracto gastrointestinal de los pollosalrededor de los 14 días de edad, y basta con la colonización de un pollo paraque se infecte el resto del lote3. Se desconocen los mecanismos por los cuales Campylobactertermotolerante ingresa en la granja de crianza pero se sabe que existe unatransmisión horizontal de esta bacteria a través de diferentes vectores yfómites que pueden aumentar el riesgo de colonización y diseminación2. Algunosposibles vectores y fómites que pueden aumentar el riesgo de colonización ydiseminación podrían ser: el agua de bebida, el alimento balanceado, la cama,insectos, aves silvestres, roedores, personal y otros animales 2, 3, 4. Es por eso que resultainteresante indagar sobre el rol que tienen estos potenciales vectores yfómites en la difusión de Campylobacter termotolerante en la granja decrianza, así como también determinar que influencia podrían llegar a tener enla permanencia de esta bacteria en el galpón de crianza y así favorecer lacolonización de pollos en sucesivas crianzas. Para intentar dilucidar el rolde estos vectores y fómites se realizó un muestreo en una granja avícola comercial.Para ello se visitó dicha granja en el período comprendido entre dos crianzasde pollos sucesivas. En primer lugar, se visitó la granja una semana previa alingreso de los pollos y se tomaron muestras de: cama del galpón de crianza (n=15), agua de bebedero (n= 10), alimento balanceado (n= 10), insectos de la cama(n= 40), moscas (n= 20), aves silvestres (n= 15), animales domésticos presentesen la granja (n= 5), y botas del personal de trabajo (n= 5). En la segundaetapa se visitó la granja en la semana previa al sacrificio de los pollos. Endicha etapa se tomaron las mismas muestras y se agregaron muestras de hisopadosde cloacas de pollos (n=30). Todas las muestras, tanto de laetapa previa a la crianza como previa al sacrificio se llevaron refrigeradas allaboratorio y se incubaron en caldo Bolton suplementado con cicloheximida (50mg/l), cefoperazona (20 mg/l), trimetoprima (20 mg/l) y vancomicina (20 mg/l).La incubación se realizó durante 24 h a 42ºC en condiciones de microaerofilia(85% H2,10% CO2 y 5% O2). El aislamiento de Campylobacterse realizó mediante el método de filtración pasiva en placas de agarmodificado carbón-cefoperazona-desoxicolato (mCCDA). Para ello, los caldosBolton luego de la incubación fueron centrifugadas a 4500 g durante 10 minutosy el pellet resultante de cada uno de ellos se depositó sobre un filtro denitrocelulosa (0.45μm) estéril previamente colocado sobre el agar mCCDA. Lafiltración pasiva se realizó a 37ºC durante 10 minutos y posterior a eso seretiró el filtro de la placa y esta se incubó a 42ºC durante 48 h encondiciones de microaerofilia. Luego de la incubación se observaron lascolonias presuntivas y se determinó la presencia de Campylobacter termotolerantepor morfología típica en microscopio de contraste de fases. Las coloniaspresuntivas fueron subcultivadas en agarmCCDA y posteriormente se conservaron a -80ºC en medio crioprotector. A partir de cada aislamiento serealizó una extracción de ADN mediante el método de ebullición a 95ºC durante10 minutos y posterior centrifugado. Una alícuota del sobrenadante se utilizócomo templado en una PCR múltiple (Vandamme et al., 1997) para ladeterminación de la especie Campylobacter jejuni o Campylobacter colide cada aislamiento. Como primer resultado, no seobtuvieron aislamientos de Campylobacter termotolerantes en los dosmuestreos realizados en la etapa previa a la crianza. Sin embargo, en la etapaprevia al sacrificio se obtuvieron 121 (58,5%) aislamientos de Campylobactertermotolerante. De los 121 aislamientos obtenidos previo a la etapa defaena, el 69% (n=83) pertenecieron a la especie C. jejuni y el 31% (n=38) fueron C.coli. Por otro lado, el 68% de los aislamientos fueron deobtenidos de los pollos parrilleros (63% C. jejuni, 37% C. coli),el 17% fueron de insectos de la cama (80% C. jejuni, 20% C. coli),el 16% de los aislamientos fueron de aves silvestres (95% C. jejuni, 5% C.coli); el 10% de la cama del galpón (50% C. jejuni, 50% C. coli);y por último, 2% de los aislamientos fueron obtenidos de las botas de losoperarios de la granja (100% C. coli). La ausencia de aislamientos enla etapa previa a la crianza podría deberse a múltiples factores como laausencia de los pollos (principal reservorio de este microorganismo),aplicación de planes de limpieza y desinfección, remoción de la cama, vaciadode bebederos. Todos estos factores podrían estar influyendo en el desarrollo ysupervivencia de Campylobacter termotolerantes pero también podríanestar induciendo en esta bacteria el cambio a un estado viable pero nocultivable. Se puede observar también que de los vectores y fómites muestreadosla mayor cantidad de aislamientos fueron obtenidos de aves silvestres y de losinsectos de la cama. En aves silvestres, los hábitos de alimentación y comportamientoen las cercanías del galpón de crianza influenciaría la prevalencia de Campylobatcertermotolerantes y puede tener un papel importante en su epidemiología3. Para el casode los insectos de la cama, la presencia de Campylobacter termotolerantesen ellos sería un importante factor de riesgo ya que el ciclo de vida de estosinsectos puede ser de 2 meses hasta 1 año por lo que persistirían en variosciclos productivos de pollos consecutivos favoreciendo así la permanencia ydifusión de Campylobacter. La presencia de esta bacteria en estosvectores favorece la transmisión horizontal de Campylobacter dentro deun galpón en una misma crianza de pollos, así como también podrían estarinfluyendo en la transmisión de esta bacteria en los diferentes procesos productivoso la introducción del mismo en la granja. Sin embargo, es necesario realizarnuevas investigaciones tendientes a explicar por qué estos vectores nopresentaron aislamientos positivos de Campylobacter hasta que el pollono estuvo presente en la granja. Por otro lado, también es de destacar la granpresencia de aislamientos pertenecientes a la especie C. jejuni, lo quetambién es muy importante a tener en cuenta debido a que es la especie másreportada en infecciones gastrointestinales humanas. Esta información permite comprender aspectoseco-epidemiológicos de Campylobacter termotolerantes en las granjasavícolas para intentar la reducción o eliminación de este patógeno y asíminimizar el problema de salud pública que originan. Las estrategias deintervención deben considerar la naturaleza compleja de su transmisión y puedenrequerir el uso de enfoques múltiples que se dirijan a diferentes segmentos delsistema de producción avícola.