Liposomas recubiertos con proteína de capa S como vehículos de administración oral de antígenos

HOLLMANN, AXEL; DELFEDERICO, LUCRECIA; DISALVO, ANIBAL; GLIKMANN, GRACIELA; DE ANTONI, GRACIELA; SEMORILE, LILIANA

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano y X Congreso Argentino de Microbiología; 2004

Existe gran interés en el desarrollo de nanopartículas utilizables como vehículos de transporte y entrega de antígenos para vacunación oral. La asociación de una proteína antigénica con un carrier nanoparticulado apropiado presenta la ventaja de proteger al antígeno de la degradación durante su tránsito por el tracto gastrointestinal. La capa S es una envoltura cristalina y regular, formada por proteínas o glicoproteínas que se ordenan bidimensionalmente formando una red que recubre la célula bacteriana. La capacidad de autoensamblar de estas proteínas puede observarse en líquido, sobre liposomas, o en interfases líquido-sólido. Estas singulares características de las proteínas de capa S las convierten en un excelente candidato para recubrir liposomas, y de esa forma estabilizarlos. El objetivo del trabajo fue desarrollar liposomas recubiertos con proteínas de capa S de Lactobacillus brevis y Lactobacillus kefir, con el propósito de estudiar la estabilidad conferida a las vesículas por estas proteínas y determinar la factibilidad de desarrollo de un vehículo vacunal de administración oral. La proteína de capa S de L. brevis (50 kDa) es no glicosilada mientras que la de L. kefir, de mayor tamaño que la anterior (69 kDa), está unida a grupos glicosilo. Se estandarizaron métodos para la obtención de monómeros proteicos a partir de las proteínas de capa S obtenidas de L. brevis y L. kefir y para reensamblar los mismos sobre los liposomas preparados con componentes naturales como lecitina de soja. Las interacciones proteína-liposoma se estudiaron mediante medición del Potencial Z de las construcciones. El encapsulamiento de carboxifluoresceína permitió el análisis de la capacidad de retención de moléculas por estas partículas. Se analizó, asimismo, la estabilidad de las mismas frente a diferentes ambientes tales como pH, presencia de sales biliares, estrés térmico y físico, y almacenamiento. Los valores de potencial Z revelaron la existencia de interacciones proteína-liposomas, observándose marcadas diferencias dependientes del origen de la proteína S. Los ensayos con carboxifluoresceína permitieron detectar interacciones a nivel de superficie y demostraron la elevada capacidad de los liposomas-capa S, respecto de los liposomas control, de retención interna de compuestos en las condiciones estudiadas. Los resultados conducen a postular que el autoensamblado de proteína de capa S sobre la superficie de liposomas confiere a estas partículas una estabilidad adecuada para su empleo como vehículos de administración de antígenos.