Estudio del desarrollo de Clostridium difficile en biofilm mixto con Bifidobacterium bifidum CIDCA 5310

TREJO, FERNANDO M; HUGO, AYELEN A; MINNAARD, JESSICA; PEREZ, PABLO F

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiología; 2016

Clostridium difficile (CD) es un bacilo esporulado, que puede inducir diarrea y colitis pseudomembranosa debido a su capacidad de producir toxinas A y B. Alteraciones en la patogénesis de CD involucran cambios en las poblaciones de riesgo, aumento en la incidencia y severidad de las infecciones y formación de biofilm como nuevo factor de virulencia a considerar.Objetivo: Evaluar el efecto de Bifidobacterium bifidum, cepa CIDCA 5310 (BB) sobre desarrollo en biofilm, actividad biológica, viabilidad y esporulación de CD cepa 117.Materiales y Métodos: Cultivos puros de CD y mixtos de ambas especies (CM) se sembraron en BHI-cisteína sobre placas de policarbonato de 24 pocillos. Como control se emplearon fosas con BHI sin sembrar. Cada cepa se sembró a DO600 = 0,05 y se incubó en anaerobiosis a 37ºC durante diferentes tiempos. El desarrollo de biofilm se evaluó mediante coloración con cristal violeta y se expresó como un factor de biofilm (Fbiof) = Abs570nmMuestra - Abs570nmControl. La actividad biológica se evaluó sobre células Vero en cultivo y posterior observación microscópica del redondeo producido. Definimos unidades arbitrarias (UA) como la inversa de la dilución que produce el 100 % del redondeo celular. Viabilidad y esporulación se cuantificaron por recuento en placa. La estructura del biofilm se evaluó a través de microscopia electrónica de barrido. Se cuantificaron proteínas totales y carbohidratos por método de Bradford y de la Antrona respectivamente.Resultados: CD y CM desarrollan biofilm a niveles máximos con diferencias significativas al día 4; alcanzando valores de Fbiof CD = 0,29 ± 0,04 y Fbiof CM = 0,9 ± 0,1 p