Producción de ramnosidasa alcalino tolerante de Verticillum tenerum en medios con harina de soja

NL ROJAS; D BLANCO FERNÁNDEZ; SF CAVALITTO,; CE VOGET; RA HOURS

La Plata, Buenos Aires

Congreso; Segundo Congreso Argentino de Microbiología General. Sociedad Argentina de Microbiología General; 2005

SAMIGE

Ramnosidasa (Rha): Denominada a-L-ramnopiranosidasa (EC 3.2.1.40),cataliza la hidrólísis de enlaces glicosídicos en ramnósidos naturales o sintéticos(heteropolisacáridos, flavonoides y compuestos aromáticos) con liberacion de Lramnosa(6-deoxy-L-manosa). Las ramnosidasas microbianas reportadas songeneralmente de origen fúngico y poseen actividad a pHs ácidos. Unas pocas, deorigen bacteriano, poseen actividad en medio alcalino débil, pero sonintracelulares. Dependiendo del sustrato sobre el que actúe pueden generardiferentes productos de interés industrial. Con naringina como sustrato seobtienen L-ramnosa y prunina (si la enzima no posee actividad b-glucosidasa) oramnosa, glucosa y naringenina (si la enzima posee las dos actividades como esel caso de las naringinasas). La opción más interesante es la primera, ya que laprunina tiene actividad antiviral, puede ser utilizada como edulcorante paradiabéticos y se ha demostrado capacidad de protección de la mucosa gástrica enmodelos animales. Además, la L-ramnosa es un químico fino que se utiliza comoreactivo químico y como material de partida en la síntesis de compuestosorgánicos. Las ramnosidasas comerciales disponibles actualmente poseenactividad a pHs ácidos, en los cuales los flavonoides son muy poco solubles, entanto que si lo son a pHs alcalinos. El uso de ramnosidasas activas en estascondiciones podría permitir la hidrólisis de soluciones mucho más concentradasde sustratos.Un estudio preliminar sobre las enzimas extracelulares producidas por hongosalcalino tolerantes aislados de suelos calcáreos de los partidos de Magdalena yPunta Indio (Pcia. de Bs. As.) demostró que un Verticillum tenerum aislado poseeun pool enzimático muy rico que incluye una a-ramnosidasa y una b-glucosidasa(independientes) activas a pHs 9.5. Este el primer caso de una a-ramnosidasacapaz de hidrolizar ramnósidos sintéticos y naringina en estas condiciones. Por lodicho anteriormente, el potencial industrial de dicha enzima es altamenteremarcable. Los primeros estudios mostraron que la utilización de Jugo V8®resultó un buen inductor de las enzimas de V. tenerum, incluidas la a-ramnosidasa y la b-glucosidasa. En el presente trabajo se estudió la expresión deambas enzimas con harina de soja como fuente de carbono y energía (FCE). Estesustrato es un potente inductor inespecífico de enzimas hidrolíticas. Los cultivosse realizaron en erlenmeyers agitados (200 rpm), a 30°C, por 14 días. Lacomposición del medio de cultivo fue la siguiente (en g/l): harina de soja 15,triptona de caseína 2,5, MgSO4 0,5, KCl 0,5, FeSO4 0,01, ácido cítrico 0,01,K2HPO4 1, NaCO3 1 y naringina 1,25.Durante los primeros días de cultivo se recupera mayor actividad glucosidasaque ramnosidasa. Luego de 9 días la primera deja de aumentar en tanto que laramnosidasa sigue aumentando, obteniéndose el máximo de actividad enzimáticaa los 11 días de cultivo, con un incremento del orden de 10 veces en la actividada-ramnosidasa con respecto al medio con V8 como FCE.El aislamiento, purificación y caracterización de las enzimas responsables deambas actividades está en curso.