INVESTIGADORES
ROJAS Natalia Lorena
congresos y reuniones científicas
Título:
CARACTERIZACIÓN DE UNA POLIGALACTURONASA PRODUCIDA POR PICHIA ANOMALA
Autor/es:
MARTOS, M.A.; N.L. ROJAS; BUTIUK, A.P.; ZUBRESKI, E.R.; HOURS R.A.
Reunión:
Congreso; XII Congreso Argentino de Micología; 2011
Resumen:
Las
protopectinasas (PPasas) son un grupo heterogéneo de enzimas, capaces de
liberar pectina soluble de alto PM a partir de protopectina de tejidos
vegetales. En estudios previos se ha purificado una poligalacturonasa con
actividad PPasa, producida en medio líquido por Pichia anomala, una levadura aislada de cáscaras de frutas cítricas
en la provincia de Misiones (Argentina).
El objetivo del presente trabajo fue realizar la
caracterización bioquímica de la enzima poligalacturonasa (PG) producida por P. anomala.
El extracto enzimático se obtuvo a partir de
cultivos de P. anomala desarrollados
a escala de frascos agitados (180 rpm, 30 ºC)
durante 10 h, en un medio de cultivo compuesto por Yeast Nitrogen Base, glucosa
y pectina de citrus. Para el proceso de purificación, el extracto enzimático
fue dializado y luego sometido a una cromatografía de intercambio catiónico. El
peso molecular de la enzima purificada se determinó por electroforesis en geles
de poliacrilamida (SDS-PAGE). El pH óptimo de
actividad PG fue determinado midiendo la actividad enzimática en el rango de pH
entre 2,6 y 7. El efecto del pH y la temperatura sobre la estabilidad de
la enzima se determinaron por preincubación de la enzima en ausencia de
sustrato, a diferentes valores de pH (2,6 a 7) y temperaturas (37 a 55 ºC) y posterior
determinación de la actividad enzimática residual. Los parámetros cinéticos Vmáx
y Km fueron determinados a partir de medidas de velocidad inicial
empleando ácido poligalacturónico como sustrato en un rango de concentraciones
de 0,05 a
2,5 g/l, al pH óptimo y a 37
°C. Se determinó el efecto de ciertos cationes, tales
como Cu+2, Ca+2, Fe+3, K+, Mg+2,
Mn+2 y Zn+2, sobre la actividad enzimática. La capacidad
macerante de la enzima PG, se determinó por evaluación de pérdida de coherencia
de tejidos de papa, por medio del agregado de la enzima pura.
La enzima purificada con actividad PG, presentó un
peso molecular de aproximadamente 43 kDa. Los valores de Vmax y Km
obtenidos fueron de 0,259 mmol/l.min y 1,73 mg/ml, respectivamente. PG exhibió
máxima actividad a pH 4,2, fue estable en un rango de pH entre 3,5 - 5,5 y
hasta 49 ºC
durante 10 h. Los cationes que produjeron una disminución de la actividad PG
fueron K+ y Ca+2. Se observó ablandamiento de los tejidos
de papa al utilizar la enzima purificada, confirmándose de este modo la
actividad PPasa de la enzima.
La enzima mostró características interesantes tales
como máxima actividad a valores ácidos de pH y alta estabilidad en un amplio
rango de pH y temperaturas. Estas propiedades sugieren su potencial aplicación en
industrias de alimentos, principalmente en el procesamiento de frutas y
vegetales, considerando la naturaleza
ácida de los mismos.