Caracterización de la capacidad celulolítica de consorcios bacterianos y aislamientos puros de suelos forestales

SILVINA GHIO; SOFÍA SAMPAOLESI; PAOLA TALIA; ÁNGEL CATALDI

CABA

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

CARACTERIZACIÓN DE LA CAPACIDAD CELULOLÍTICA DE CONSORCIOSBACTERIANOS Y AISLAMIENTOS PUROS DE SUELOS FORESTALESS Ghio1, S Sampaolesi2, P Talia2, A Cataldi2, D Grasso1, E Campos21 Instituto de Suelos, CIRN, INTA Castelar, Argentina. 2 Instituto deBiotecnología, CICVyA, INTA Castelar, Argentina.La biomasa lignocelulósica constituye una de las materias primasutilizadas en la producción de bioetanol de segunda generación, por locual la prospección de bacterias de ambientes forestales con capacidadde degradación de sustratos celulósicos e identificación de sus enzimascelulolíticas contribuye a optimizar el proceso. El objetivo de este trabajo fueel aislamiento, identificación y caracterización de la capacidad celulolíticade bacterias de suelos forestales. El enriquecimiento de las mismas se realizóen medio mínimo líquido con extracto de levadura y carboximetilcelulosa(CMC), el aislamiento por repique en el mismo medio agarizado y ladetección de las colonias celulolíticas por tinción superficial de las placascon Rojo Congo o con el colorante Azul de Tripán dentro del medio decultivo. La identificación bacteriana se realizó por amplificación, clonadoy secuenciación del gen rRNA 16S. Los aislamientos fueron cultivados tantocon carboximetilcelulosa como con celulosa fluff, y se analizó la capacidadhidrolítica sobre CMC, la actividad CMCasa de los sobrenadantes libresde células y se identificaron las enzimas degradadoras de CMC mediantezimogramas. Se obtuvieron aislamientos primarios identificados comoconsorcios bacterianos: CB1-2 compuesto por Bacillus sp., Paenibacillus sp.,Pseudomonas sp. y Stenotrophomonas sp. y VG-4 integrado por Pseudomonassp., Achromobacter sp. y Stenotrophomonas sp. A partir de estos, CB1-2-A5 yVG-4-A2 fueron aislados como sub-consorcios integrados por Lysinibacillussp., Paenibacillus sp. y Stenotrophomonas sp. (CB1-2-A5) y Paenibacillussp., Stenotrophomonas sp. y Achromobacter sp. (VG-4-A2). Los aislamientoscelulolíticos puros CB1-2-A59 y VG-4-A29 resultaron especies diferentesdel género Paenibacillus. La capacidad hidrolítica y la actividad CMCasa(relativizada por densidad óptica de cultivo, a 600 nm) fueron mayores enlos aislamientos cuando fueron cultivados con carboximetilcelulosa queen un sustrato complejo como la celulosa, excepto la capacidad hidrolíticade CB1-2 y CB1-2-A59 que fue similar entre el cultivo en ambos sustratos.A partir de los cultivos con CMC, el índice de capacidad hidrolítica resultómayor para CB1-2-A5 (4.8), CB1-2-A59 (4.93) y VG-4-A29 (4.71) mientrasque la mayor actividad CMCasa fue determinada para el consorcio CB1-2 (0.262 UI/ml) y la menor para VG-4 (0.117 UI/ml), resultando valoresintermedios y similares entre el resto de los aislamientos. Los zimogramasrevelaron bandas proteicas de 40, 55 y 70 kDa para CB1-2 y CB1-2-A5, de40 y 55 kDa para CB1-2-A59 y VG-4-A29 y una de 40 kDa para VG-4-A2,cuando se cultivaron en CMC. En conclusión, si bien todos los aislamientosobtenidos en este trabajo mostraron una buena capacidad celulolítica, sedestacó el consorcio CB1-2 como fuente promisoria de enzimas celulolíticasy los aislamientos puros del género Paenibacillus como candidatos.