Caracterización de la actividad celulolítica de una cepa de Cellulomonas sp. aislada a partir de una muestra de suelo de bosque nativo de la provincia de Misiones, República Argentina

SOFÍA SAMPAOLESI; SILVINA GHIO; EMILIANO BEN GUERRENO; GONZALO SABARÍS DI LORENZO

CABA

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

CARACTERIZACIÓN DE LA ACTIVIDAD CELULOLÍTICA DE UNA CEPA DE CELLULOMONAS sp. AISLADA A PARTIR DE UNA MUESTRA DE SUELO DE BOSQUE NATIVO DE LA PROVINCIA DE MISIONES, REPUBLICA ARGENTINAS Sampaolesi1, S Ghio2, E Ben Guerrero1, G Sabarís Di Lorenzo1, E Campos11 Instituto de Biotecnología, CICVyA, CNIA, INTA Castelar, Argentina. 2 Instituto de Suelos, CNIA, INTA Castelar, Argentina, ArgentinaLa producción de bioetanol a partir de desechos agrícolas, hierbas y desechos de la industria maderera tiene importancia como alternativa eco-sustentable al empleo de combustibles fósiles. La utilización de biomasa lignocelulósica para la producción de biocombustibles requiere la optimización del proceso de bioconversión de la misma en sus componentes fermentables.El objetivo del presente trabajo es la identificación de un aislamiento, denominado B6a, obtenido a partir de muestras de suelo de bosque nativo de la provincia de Misiones y la caracterización de su actividad celulolítica sobre distintos sustratos lignocelulósicos.Por análisis de la secuencia competa del gen de ARNr 16S y la construcción de un árbol filogenético, determinamos que el aislamiento obtenido corresponde al género Cellulomonas sp. La secuencia del gen fue depositada en la base de datos del NCBI y asignada el número KC407604.Se ensayó la capacidad del aislamiento de crecer en medio mínimo (MM) suplementado con sustratos celulósicos (0,5%-1%) como única fuente de carbono. Los sustratos ensayados fueron carboximetil celulosa (celulosa soluble, CMC), eucaliptus molido, residuo de agricultura de caña de azúcar pre-tratado y tiras de celulosa. Se comprobó crecimiento en todos los casos, lo que demuestra la capacidad del aislamiento de utilizar estos sustratos como fuente de carbono.Para evaluar la secreción de enzimas en distintas condiciones de cultivo se ensayó la actividad enzimática en sobrenadantes de cultivo libres de células (SNL) obtenidos de cultivos crecidos en los diferentes sustratos. Se comprobó la presencia de enzimas celulolíticas en los SNL mediante siembra de gotas en placa de MM-CMC y revelado de halo de degradación por tinción con rojo congo. Se observó un patrón diferencial de expresión proteica por SDS-PAGE de los SNL; asimismo se advirtió la presencia común de una proteína de aproximadamente 50kDa en todas las condiciones de cultivo. La actividad CMCasa de las proteínas observadas se evidenció en un zimograma (gel 10% poliacrilamida-1% CMC), revelado mediante tinción de rojo congo. La proteína de 50 kDa presentó actividad CMCasa en todos los casos. También se observó la presencia de otras proteínas con actividad CMCasa con patrón diferencial de expresión en los distintos sustratos ensayados.La actividad endoglucanasa fue cuantificada en los SNL utilizando CMC como sustrato, por el método de ácido 3,5 dinitrosalicílico. Se detectó actividad celulolítica en SNL obtenidos de cultivos en todos los sustratos. La máxima actividad obtenida fue de 0,035 UI/ml de SNL de cultivo de B6a en MM-CMC 1% de 72hs.Este trabajo muestra la capacidad del aislamiento B6a de crecer y metabolizar sustratos lignocelulósicos, característica que lo hace una fuente atractiva para la identificación de enzimas con actividad celulolítica.