Selección de levaduras biocontroladoras para enfermedades de poscosecha de peras

LUTZ, C.; SOSA, C.; LOPES,C.A.; SANGORRÍN, M.P

Jornada; III Jornadas Nacionales de Biología y Biotecnología de Levaduras; 2011

En el Alto Valle de Río Negro y Neuquén, Penicillium expansum y Botrytis cinerea, son los principales patógenos de peras de larga conservación. Dado que el control biológico es una de las opciones más promisorias, en este trabajo se planteó la búsqueda de levaduras antagónicas para los patógenos regionales, mediante una estrategia de aislamiento y selección particular. Los patógenos se aislaron de fruta almacenada con síntomas de podredumbre. Los aislamientos de P. expansum NPCC2023 y B. cinerea NPCC2049 se seleccionaron por su agresividad y resistencia a fungicidas. Las levaduras se aislaron desde superficie y heridas sanas (artificiales sin podredumbre) de pera, de 2 cultivares y dos empaques, luego de 6-7 meses de conservación en frío. Se evaluaron aguas de lavado en heridas artificiales en pera frente a P. expansum a 4ºC. Se obtuvieron 107 aislamientos de levaduras desde aguas que redujeron la severidad (40%) y la incidencia de la enfermedad (50%). Del total, se identificaron 11 especies por PCR-RFLP de la región ITS1-5.8S-ITS2 rDNA y por secuenciación del dominio D1/D2 del gen 26 S. Aislamientos de levaduras (26) de aguas seleccionadas tanto de superficie (11) como de heridas (15), se evaluaron individualmente in vivo frente a P. expansum a -1/0ºC. Se inocularon heridas en pera con 2.104 células de cada levadura y posteriormente con el patógeno a CMI. Todos los aislamientos controlaron el 100% de la enfermedad hasta los 100 días; mientras que sólo el 38% lo hizo a los 200 días. Estos aislamientos (38%), enfrentados a B. cinerea, presentaron menor eficacia que frente a P. expansum. Cryptococcus albidus NPCC1248, Pichia membranifaciens NPCC1250, C. victoriae NPCC1259 y NPCC1263, y C. weringae NPCC1268 resultaron los aislamientos más promisorios. Estas levaduras, se reevaluaron in vivo frente a ambos patógenos a -1º/0ºC. A los 120 días, C. victoriae (NPCC1263) y P. membranifaciens se destacaron por controlar totalmente a P. expansum (0% de podredumbre); y la baja incidencia de B. cinerea (0 y 10%, para cada levadura respectivamente). Los posibles mecanismos antagónicos: actividad enzimática, formación de biofilms, liberación de volátiles y producción de toxinas killer se evaluaron ?in vitro?. Las 5 levaduras presentaron actividad glucanasa y C. weringae, actividad proteasa. Los dos aislamientos de C. victoriae formaron biofilms. A -1º/0ºC, C. weringae y C. victoriae NPCC1268 mostraron actividad killer frente a los patógenos. Ningún aislamiento presentó actividad quitinasa ni pectinasa, producción de compuestos volátiles a - 1º/0ºC, ni producción de toxinas killer frente a levaduras sensibles y a los patógenos a 20ºC. La colonización de las 5 levaduras en las heridas de pera se evaluó durante 120 días a -1º/0ºC. Todos los aislamientos se establecieron, destacándose C. albidus, P. membranifaciens y C. victoriae NPCC1263.